Vesículas extracelulares: potencial como biomarcadores y papel en la patogénesis de la enfermedad

Las encefalopatías espongiformes transmisibles (EET) son un conjunto de enfermedades neurodegenerativas de evolución fatal producidas por la acumulación de proteína prion patológica (PrPSc), una isoforma mal plegada de la proteína prion celular (PrPC), en el tejido nervioso. Se han descrito EET en varias especies animales, incluida la especie humana, donde la más común es la enfermedad de Creutfeldt-Jakob. Este trabajo se realizó en scrapie ovino, ya que esta enfermedad se emplea como modelo de investigación de las EET. El diagnóstico de las EET se realiza en base a la clínica o detectando la PrPSc, ya sea post-mortem o in vivo mediante técnicas invasivas y poco sensibles en el caso del scrapie. Esto hace necesaria la búsqueda de biomarcadores tempranos en las EET. Los exosomas son vesículas extracelulares membranosas de hasta 150 nm de diámetro que participan en el transporte intercelular y son capaces de atravesar la barrera hematoencefálica. En este estudio se pretendió investigar si los exosomas participan en la propagación y la diseminación de la proteína prion en el scrapie ovino y evaluar el potencial de los exosomas como fuente de biomarcadores de scrapie en fluidos periféricos accesibles (sangre y orina) en la especie ovina. Se aislaron exosomas de ambos fluidos, siendo la primera vez que se describe su aislamiento a partir de orina ovina. Posteriormente se caracterizaron y se determinó la posible presencia de PrPSc mediante amplificaron mediante PMCA, no detectándose la presencia de PrPSc en ninguna de las muestras. Además, se analizó si estas vesículas participan en la toxicidad asociada a estas enfermedades observada previamente in vitro. Para ello se evaluó el efecto del tratamiento con exosomas de plasma de ovino con scrapie y control sobre cultivos de células madre mesenquimales ovinas con genotipo susceptible a scrapie. Se observó una elevada variabilidad entre los diferentes orígenes de exosomas y se detectaron algunos factores que podían estar influenciando los resultados observados. Esto permitió definir un protocolo para minimizar la variabilidad en este tipo de ensayos, que podrá utilizarse en trabajos posteriores. Por último, se logró aislar y caracterizar por primera vez exosomas de tejido nervioso en ovino. Se optimizó la homogeneización y el aislamiento de estas vesículas, lo cual permitirá analizar exosomas de tejido nervioso de ovino con scrapie en futuros estudios para conocer cuál es su implicación en la patogenia de la enfermedad.