Tulasnella irregularis (basidiomycota: tulasnellaceae) from roots of Encyclia tampensis in south Florida, and confirmation of its mycorrhizal significance through symbiotic seed germination

Epiphytic orchids remain understudied with respect to their obligate mycorrhizal relationships – a key component of the integrated conservation model. Existing studies have revealed that these plants, like their terrestrial counterparts, commonly associate with ubiquitous basidiomycetes (e.g., Tulasnellaceae); however, few studies have verified their physiological role(s). Two strains of mycorrhizal fungi (UAMH 11541, UAMH 11543) were isolated from roots of an epiphytic orchid in south Florida, Encyclia tampensis; one was acquired from a seedling and one from a mature specimen. Seeds of four epiphytic taxa were subsequently inoculated (separately) with both fungal strains in vitro: E. tampensis, Epidendrum amphistomum, Epidendrum nocturnum, and Prosthechea cochleata. More than one-third of inoculated E. tampensis and E. nocturnum seeds developed leaves in total darkness after 100 days. No significant differences were detected between the two strains on germination, nor any interaction between fungus and seed source (ANOVA, α = 0.05). Using ITS amplification and sequencing, both strains were identified as the teleomorph, Tulasnella irregularis (Basidiomycota: Tulasnellaceae), and both were genetically identical with a high (98%) degree of certainty. Thus, symbiotic germination and ITS sequencing results are in agreement that both strains are indeed the same fungus. This paper is meant to shed additional light into epiphytic orchid-fungal interactions and highlights the need to identify, test (through symbiotic germination) and safeguard mycorrhizal fungi necessary for conservation.Las relaciones micorríticas obligadas de las orquídeas epífitas – un componente clave en el modelo integrado de conservación – siguen desconocidas. Los estudios existentes han revelado que estas plantas, así como sus equivalentes terrestres, se asocian normalmente con basidiomicetos ubícuitos (e.g. Tulasnellaceae); sin embargo pocos estudios han verificado su papel fisiológico. Dos cepas del hongo micorrítico (UAMH 11541, UAMH 11543) fueron aisladas de las raíces de una especie de orquídea epifítica del sur de Florida, Encyclia tampensis – una obtenida de una plántula joven y la otra obtenida de una planta madura. Las semillas de cuatro taxones epífitos fueron inoculadas por separado con los dos hongos aislados in vitro: E. tampensis, Epidendrum amphistomum, Epidendrum nocturnum y Prosthechea cochleata. Más de un tercio de las semillas de E. tampensis y E. nocturnum (ambos inoculados) desarrollaron hojas cuando fueron mantenidos en total obscuridad por más de cien días. No se detectaron diferencias significativas entre las dos cepas del hongo con respecto a la germinación y la interacción entre el hongo y las semillas procedentes de diferentes fuentes (ANOVA, α= 0.05). Usando amplificación y secuenciación ITS, ambas cepas fueron identificadas como teleomorfos, Tulasnella irregularis (Basidiomycota: Tulasnellaceae) y ambas resultaron genéticamente idénticas con un elevado grado (98%) de seguridad. De esta manera, tanto la germinación simbiótica así como los resultados de la secuenciación ITS concuerdan en identificar con certeza ambas cepas como el mismo hongo. Este artículo trata de elucidar las interacciones entre orquídeas epífitas y hongos micorríticos y también subraya la necesidad de identificar, comprobar (a través de germinación simbiótica), y preservar los hongos micorríticos necesarios para fines de conservación