Add to ORKG本文以重组非糖基化人促红细胞生成素（rh-ngEpo）为目标蛋白质，对以包涵体形式表达的rh-ngEpo的制备过程和聚乙二醇（PEG）化修饰策略进行了详细研究，对单修饰产物的药代动力学和药效学性质进行了评估，并与糖基化人促红细胞生成素（rhEpo）进行比较，探索PEG修饰取代糖基化提高rh-ngEpo体内生物活性策略的可行性。实验考察了常用的复性添加剂对rh-ngEpo复性收率的影响，发现蔗糖、环糊精、甘油、吐温、PEG均不能有效的抑制聚集沉淀。2 M脲、1 M盐酸胍和0.5 M精氨酸能有效抑制复性时不溶性聚集体的形成，但2 M脲时复性蛋白以可溶性寡聚体的形式存在，1 M盐酸胍则抑制了蛋白质的折叠，只有0.5 M精氨酸既能抑制聚集沉淀，又能提高正确折叠结构的含量，复性率最高。实验发现，阳离子交换层析能够有效除去复性液中的大部分高分子量杂蛋白，但不能除去复性过程形成的可溶性聚集体，因此通过离子交换层析纯化后，又采用凝胶过滤层析除去可溶性聚集体。整个工艺流程的蛋白质量收率为17%，rh-ngEpo的纯度大于95%，免疫活性达到了2.13×105 IU/mg，高于rhEpo的1.81×105 IU/mg。对精氨酸辅助rh-ngEpo复性的动力学过程研究发现，高浓度精氨酸会大大延缓蛋白的复性速率，同时还会促进可溶性寡聚体的形成，降低复性效率。GSSG可以提高rh-ngEpo在精氨酸中的折叠速率，但也促进了分子间的二硫键配对，降低了收率。此外，我们发现精氨酸抑制聚集的能力与蛋白复性早期形成的爆破相中间体的疏水性有关，中间体的疏水性越强，精氨酸抑制其形成不溶性聚集体的能力就越弱。通过在变性条件下利用阳离子交换柱从包涵体中纯化rh-ngEpo后再复性的新工艺，显著减...