Photodynamic effect mediated by methylene blue on the inactivation of Leishmania (L.) amazonensis. An in vitro study

Submitted by Pedro Silva Filho (pfsilva@ipen.br) on 2018-01-30T10:59:13Z No. of bitstreams: 0Made available in DSpace on 2018-01-30T10:59:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0A terapia fotodin??mica (PDT) ?? uma modalidade terap??utica utilizada para causar morte celular baseada no uso de f??rmacos fotossensibilizadores e aplica????o de luz com comprimento de onda adequado. No processo fotodin??mico, a mol??cula do fotossensibilizador (FS) ?? excitada para o seu estado singleto como resultado da absor????o da luz gerando estresse oxidativo em diversas estruturas celulares, dentre elas a mitoc??ndria. A gera????o do estresse oxidativo pode induzir a resposta de morte por via apopt??tica. Esse estudo tem como objetivo avaliar o tipo de resposta de morte celular em formas promastigotas metac??clicas de Leishmania (L.) amazonensis submetidas ?? PDT utilizando o azul de metileno como FS. Para isso algumas condi????es como capta????o do FS pela c??lula, pot??ncia de irradia????o (100 mW/ 250m W), concentra????o do FS (50, 100, 250 e 500 μM) e tempo de irradia????o (60 s /300 s) foram testadas para compreender a resposta do parasito a esse desafio leishmanicida. Ap??s essas etapas foi investigada a viabilidade das promastigotas por meio da atividade mitocondrial utilizando o MTT ((brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium). Em seguida, a exposi????o de fosfatidilserina, a permeabilidade de membrana e a altera????o de potencial de membrana da mitoc??ndria foram avaliados para analisar a via de resposta de morte celular provocada pela a????o fotodin??mica e as poss??veis mudan??as morfol??gicas e ultraestruturais que esse parasito pudesse apresentar. Os resultados obtidos pelos testes \"in vitro\" de viabilidade celular (MTT) das promastigotas demostra que a terapia consegue diminuir a atividade metab??lica em at?? 80%, na condi????o de 50 μM - 100 mW/300s. Foi poss??vel concluir que promastigotas de L.(L.) amazonensis sofrem dano celular provocado pelo estresse oxidativo. A morte celular desse parasito ?? possivelmente por via apopt??tica. A an??lise por microscopia eletr??nica de transmiss??o indica danos celulares como encolhimento celular, arredondamento, vacuoliza????o do meio intracelular, perda de integridade do flagelo e migra????o da cromatina nuclear para a periferia da membrana do n??cleo do parasito.Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear)IPEN/TInstituto de Pesquisas Energ??ticas e Nucleares - IPEN-CNEN/S