The study of conjugation of anti-CD20 monoclonal antibody for labeling with metalic or lanthanides radionuclides

Submitted by Pedro Silva Filho (pfsilva@ipen.br) on 2017-11-17T17:17:04Z No. of bitstreams: 0Made available in DSpace on 2017-11-17T17:17:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0Linfomas s??o c??nceres que se iniciam a partir da transforma????o maligna de um linf??cito no sistema linf??tico. Os linfomas s??o divididos em duas categorias principais: os linfomas de Hodgkin e todos os outros linfomas, denominados linfomas n??o-Hodgkin (LNH). Os pacientes com LNH s??o comumente tratados com radioterapia apenas ou combinada com quimioterapia utilizando-se de anticorpo monoclonal anti-CD20, principalmente o rituximab (MabThera&reg). O uso de anticorpos monoclonais (Acm) conjugados ?? quelantes bifuncionais radiomarcados com radionucl??deos met??licos ou lantan??deos ?? uma realidade de tratamento para portadores de LNH pelo princ??pio de radioimunoterapia (RIT). Este estudo concentrou-se nas condi????es de conjuga????o do anticorpo monoclonal rituximab (MabThera&reg) com grupamentos quelantes bifuncionais DOTA e DTPA. Na marca????o dos Acm conjugados com lut??cio-177, foram estudadas as condi????es de pr??-purifica????o do Acm, condi????es de conjuga????o, determina????o de n??mero de quelantes acoplados ?? mol??cula do anticorpo, purifica????o do anticorpo conjugado, radiomarca????o do anticorpo conjugado, com lut??cio-177, purifica????o do anticorpo marcado, a liga????o espec??fica in vitro dos compostos marcados ??s c??lulas Raji, e distribui????o biol??gica em camundongos BALB/c sadios. As tr??s metodologias empregadas na pr??-purifica????o do anticorpo (di??lise, cromatografia de exclus??o molecular com coluna Sephadex G-50 e ultrafiltra????o) demonstram-se eficientes e proporcionaram recupera????o da amostra superior a 90%. A metodologia de ultrafiltra????o foi considerada a mais simples e pr??tica, podendo ser aplicada a procedimentos rotineiros de produ????o de radiof??rmacos. Al??m disso, proporcionou a recupera????o final de amostra de 97% em microlitros. Nas conjuga????es do anticorpo com os quelantes DOTA e DTPA em raz??es molares diferentes do Acm:quelante, observou-se n??mero de grupamentos quelantes acoplados ?? mol??cula do Acm proporcional ?? raz??o molar estudada. Quando foi avaliada a influ??ncia de condi????es diferentes de conjuga????o no n??mero de quelantes acoplados ?? mol??cula do Acm, n??o foram observadas diferen??as significativas, com resultados de pureza radioqu??mica (PR) inferior a 80% em todas as condi????es estudadas. Na compara????o de m??todos de purifica????o do Acm conjugado, a abordagem in??dita apresentada neste estudo, na qual a cromatografia de exclus??o molecular foi combinada com a ultrafiltra????o resultou em maior efici??ncia na purifica????o e preserva????o da estrutura do anticorpo. Nos estudos de radiomarca????o do anticorpo conjugado com DOTA e DTPA, os imunoconjugados de DTPA apresentaram, de forma geral, maior efici??ncia de marca????o com resultados reprodut??veis quando comparados com os imunoconjugados de DOTA, considerando-se as diferentes raz??es molares utilizadas. As metodologias cromatogr??ficas empregadas no controle de pureza radioqu??mica do composto radiomarcado proporcionaram a discrimina????o das diferentes esp??cies radioqu??micas no meio de marca????o. A metodologia de purifica????o do composto conjugado e radiomarcado utilizada proporcionou a obten????o de compostos com alta pureza radioqu??mica, 97,4±1,3% (DOTA 1:50) e 98,7±0,2% (DTPA 1:50). Nos estudos de liga????o espec??fica ??s c??lulas tumorais Raji, o anticorpo conjugado com quelante DTPA nas raz??es molares de 1:50 e 1:20 apresentaram perfil semelhante de liga????o, com aumento da porcentagem de liga????o espec??fica proporcional ?? concentra????o celular, enquanto que o imunoconjugado na raz??o molar de 1:10 apresentou alta porcentagem de liga????o n??o espec??fica. Os resultados obtidos nos estudos de biodistribui????o in vivo do anticorpo conjugado e radiomarcado nem sempre se mostraram compat??veis com a biodistribui????o de anticorpos radiomarcados ??ntegros. No caso do quelante DOTA, o imunoconjugado obtido a partir da raz??o molar 1:20, apresentou melhores caracter??sticas de biodistribui????o. No caso do quelante DTPA, a raz??o molar utilizada pareceu refletir diretamente no clareamento sangu??neo do anticorpo e todas as raz??es molares utilizadas apresentaram instabilidade in vivo.Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear)IPEN/TInstituto de Pesquisas Energ??ticas e Nucleares - IPEN-CNEN/S