Study of conjugation and radiolabelling of monoclonal antibody eityximab for use in radionuclide therapy

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0Linfomas s??o c??nceres provenientes da transforma????o de um linf??cito no sistema linf??tico, sendo que, o mais comum ?? o Linfoma N??o-Hodgkin (LNH). Avan??os na imunologia e na biologia molecular t??m auxiliado na detec????o desses tumores e aberto caminhos para novas estrat??gias de tratamento, como a Radioimunoterapia. O rituximab ?? um anticorpo monoclonal quim??rico anti-CD20 j?? utilizado como imunoter??pico no tratamento de LNH refrat??rios ou recidivos. O objetivo deste trabalho foi estudar a conjuga????o deste anticorpo ao quelante bifuncional DOTA-NHS-??ster e radiomarcar este imunoconjugado com o radiois??topo 177Lu, com o objetivo de desenvolver um radioimunoter??pico para tratamento de LNH. Estudos de imunoconjuga????o com diferentes raz??es molares rituximab:DOTA foram estudadas (1:5, 1:10, 1:20, 1:50, 1:250, 1:500 e 1:1000) afim de avaliar qual condi????o conferia maior pureza radioqu??mica. A estabilidade dos imuconjugados foi analisada por cromatografia de alta efici??ncia por at?? 240 dias em diferentes condi????es de armazenamento. A estabilidade do imuconjugado radiomarcado foi avaliada ap??s incuba????o a 2-8 ??C e em soro humano a 37 ??C e a liga????o ??s prote??nas s??ricas foi determinada. Estudos de biodistribui????o foram realizados em camundongos Swiss sadios a fim de caracterizar biologicamente o imunoconjugado radiomarcado. Com o objetivo de analisar se os processos de conjuga????o e de radiomarca????o n??o danificaram a capacidade de reconhecimento do ant??geno (imunorreatividade) deste anticorpo, realizou-se estudos preliminares de liga????o ??s c??lulas de LNH (Raji). Os imuconjugados de raz??o molar baixa (1:5, 1:10 e 1:20) mostraram-se est??veis quando armazenados por at?? 240 dias em diferentes condi????es. A an??lise em cromatografia em camada delgada e CLAE, revelou que o Acm conjugado na raz??o molar 1:50 foi radiomarcado com alta pureza radioqu??mica (superior a 95%) quando purificado em coluna PD-10. Este mesmo radioimunoconjugado apresentou razo??vel estabilidade a 2-8?? C. A an??lise da estabilidade em soro humano n??o indicou grande metabolismo pelas enzimas do soro. O radioimuconjugado apresentou alta liga????o ??s prote??nas s??ricas indicando clareamento sangu??neo lento, o qual foi confirmado pelos estudos in vivo. O radioimunoconjugado apresentou alta capta????o no f??gado o que ?? caracter??stico de anticorpos monoclonais. Os estudos preliminares de competi????o indicaram que o processo de obten????o do radioimunoconjugado n??o prejudicou sua liga????o ??s c??lulas Raji sendo esta liga????o espec??fica.Disserta????o (Mestrado)IPEN/DInstituto de Pesquisas Energ??ticas e Nucleares - IPEN-CNEN/S