Regeneração in vitro e transformação genética de cultivares de mandioca (Manihot esculenta Crantz) do Nordeste brasileiro

Several regenerations systems, such as somatic embryogenesis and shoot organogenesis, and the Agrobacterium tumefaciens genetic transformation system were evaluated objecting the establishment of reliable protocols for the genetic improvement of cassava cultivars from the northeastern Brazil. Direct somatic embryogenesis were aUained from shoot apexes of numerous cassava genotypes, when explants were cultivated in MS medium with 1-15 mgll picloram, supplemented with sucrose, copper sulfate and Agar. Different cultivars exhibited noticeable diverse embryogenic potentials. Cyclic somatic embryogenesis was induced by subculturing in solid induction medium. Plants were regenerated by shoot induction, in explants resultant from cyclic somatic embryos green cotyledons. After transfer to elongation medium, regenerated shoots rooted in hormone free medium. A DNA transformation protocol was established for somatic embryos green cotyledons. The plasmids employed for genetic transformation harbored genes coding for neomicine phosphotransferase (nptll), hygromicine phosphotransferase (hpt) and for J3- glucuronidase (uidA). In the majority of the explants, histochemical evidences revealed the GUS presence, confirming the transient gene expression.Com o objetivo de estabelecer protocolos eficientes de regeneração e melhoramento de cultivares de mandioca cultivadas na região nordeste do Brasil, foram avaliados- sistemas de regeneração via embiogênese somática e organogênese de brotos, e o sistema de transformação genética via Agrobacterium tumefaciens. Embriões somáticos foram induzidos a partir de ápices caulinares de diferentes genótipos de mandioca, que desenvolveram-se diretamente dos explantes quando cultivados em meio MS contendo 1-15 mg/L de picloram, suplementado com sacarose, sulfato de cobre e Agar. Foram observadas diferenças em relação à capacidade embriogênica dos diferentes cultivares. Embriogênese somática secundária foi induzida, por subcultivo em meio de indução sólido. Plantas foram regeneradas pela indução brotos, em explantes derivados de cotilédones verdes de embriões somáticos cícllcos. Depois de uma passagem por meio de alongamento, os brotos regenerados enraizaram em meio livre de hormônios. Foi estabelecido um protocolo para a introdução de DNA, em cotilédones verdes de embriões somáticos. Os plasmídios utilizados para transformação genética continham genes codificando para neomicina fosfotransferase (nptll), higromicina fosfotransferase (hpt) e para p-glucuronidase (uidA). Na maioria dos explantes foi detectada, por prova histoquímica, a presença de GUS, confirmando a expressão transiente dos genes