Evaluation of c-met signaling and its effects on mucoepidermoid carcinoma cell lines

Introduction: Malignant salivary gland tumors (MSGTs) account for approximately 2% to 6% of all head and neck neoplasms, with mucoepidermoid carcinoma (MEC) being the most frequent. MSGTs have a terrible prognosis, respond unexpectedly to the available therapies and present high rates of recurrence, leading to patients with these lesions to present a poor survival rate. The pathogenesis of MEC is still unknown, which limits the existence of molecular markers of prognosis that provides a better therapeutic approach, so tools such as cell culture are essential in the process of studying cell behavior. Immunohistochemical studies show that the Hepatocyte Growth Factor (HGF, the sole c-MET ligand) and c-MET (Tyrosine Protein Kinase MET) are present in human MSGT samples. Although these markers are present in these malignant tumors, their contribution to the pathobiology of MSGTs is unknown. Objective: To understand and investigate the role of the HGF/c-MET signaling pathway and its effects on MEC cell lines. Materials and Methods: The used MEC cell lines (UM-HMC-1, UM-HMC-3A and UM-HMC-3B) were established at the University of Michigan. Immunofluorescence and flow cytometry evaluated the presence and quantification, respectively, of the c-MET receptor in the cell lines studied. Pathway activation and signaling was tested using HGF and western blot for MET via PI3K/AKT via MAPK and histone 3. The biological impact of the activation of the HGF/c-MET pathway was assessed using cell migration assay, invasion assay and evaluation of the generation of cancer stem cells through ALDH / CD44 cell labeling. Results: The presence and activation of c-MET were detected in all MEC cell lines. The activation of c-MET, induced by HGF, promoted more invasiveness and cell migration, besides increasing the amount of cancer stem cells in the cell lines UM-HMC-1 and UM-HMC-3A. This activation also produced global changes in chromatin (histone acetylation 3). Conclusions: Our findings provide evidence that the HGF / c-MET signaling pathway is active in MEC and contributes mainly to its invasion, migration and generation of cancer stem cells.Introdução: Os tumores malignos de glândula salivar (TMGSs) representam aproximadamente 2% a 6% de todas as neoplasias de cabeça e pescoço, sendo o carcinoma mucoepidermóide (CME) a mais frequente delas. Os TMGSs possuem um ruim prognóstico, respondem inesperadamente as terapias disponíveis e apresentam altas taxas de recorrência, levando aos pacientes portadores dessas lesões a apresentarem uma pobre taxa de sobrevida. A patogênese do CME ainda é desconhecida, o que limita a existência de marcadores moleculares de prognóstico que proporcione uma melhor abordagem terapêutica, dessa forma, ferramentas como a cultura de células são essenciais no processo de estudo do comportamento celular. Estudos imunoistoquímicos mostram que o Fator de Crescimento de Hepatócito (HGF, o único ligando de c-MET) e c-MET (Tirosina-Proteína Quinase MET) estão presentes em amostras de TMGSs humanos. Embora esses marcadores estejam presentes nesses tumores malignos, sua contribuição para a patobiologia dos TMGSs é desconhecida. Objetivo: Entender e investigar o papel da via de sinalização HGF/c-MET e seus efeitos em linhagens celulares de CME. Materiais e Métodos: As linhagens celulares de CME usadas (UM-HMC-1, UM-HMC-3A e UM-HMC-3B) foram estabelecidas na Universidade de Michigan. Imunfluorescência e citometria de fluxo avaliaram a presença e quantificação, respectivamente, do receptor c-MET nas linhagens celulares estudadas. A ativação e sinalização da via foi testada usando HGF e Western blot para MET, via PI3K/AKT, via MAPK e histona 3. O impacto biológico da ativação da via HGF/c-MET foi avaliada usando ensaio de migração celular, ensaio de invasão e avaliação da geração de células-tronco cancerígenas por meio da marcação celular com ALDH/CD44. Resultados: A presença e a ativação de c-MET foram detectadas em todas as linhagens celulares de CME. A ativação de c-MET, induzida por HGF, promoveu maior invasividade e migração celular, além de aumentar a quantidade de células-tronco cancerígenas nas linhagens celulares UM-HMC-1 e UM-HMC-3A. Essa ativação também produziu mudanças globais na cromatina (acetilação de histona 3). Conclusões: Nossos achados trazem evidências de que a via de sinalização HGF/c-MET está ativa no CME e contribui principalmente para sua invasão, migração e geração de células-tronco cancerígenas