Nimodipine determination in human plasma by high-performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (HPLC-MS-MS)

A rapid, specific and highly sensitive liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was developed to determine nimodipine in human plasma using dibucaine as the internal standard (IS) is described. The analyte (m/z 418,6 > 342,6) and IS (m/z 344,2 > 271,0) were extracted from plasma samples by liquid-liquid extraction using hexane-ethyl acetate (1:1v/v). Chromatography was performed on a Varian® Polaris C18 analytical column (3 micrometer, 50 x 2,0 mm) and pre-column SecurityguardTM C18 (4,0 x 3,0 mm). The phase mobile consisted of Acetonitrile-Ammonium acetate 0.02 ml/L (80:20v/v). The method had a chromatographic run time of 4.5 min and linear calibration curve over the range 0.1- 40 ng/mL (r2 > 0.9938). The limit of quantification (LQ) was 0.1 ng/mL. The intra-day precision for the limit quantification was 0.00% (batch 01), 5.71% (batch 02) and 5.27% (batch 03); for the quality controls low (QCL), middle (QCM) and high (QCH) the results were respectively 8.57, 0.81 and 1.37%. The inter-day precision for LQ and QCL, QCM and QCH were respectively: 7% and 5.46, 4.12 and 3.37%. The intra-day accuracy for LQ was 110, 96 and 104%; for QCL, QCM and QCH the results were100.67, 109.09 and 109.72% respectively. The results of the inter-day accuracy for LQ, QCL, QCM and QCH were respectively and 110.0, 96.0, 104.0% for the limit of quantification and 8.57, 0.81, 1.37% and 100.67, 109.09, 109.72% respectively: 103% e 102.89, 106.60, 109.69%. This validated method was successfully applied for the pharmacokinetic profiles of nimodipine tablets administered to 24 healthy volunteer’s participant of bioavailability comparative study. Geometric mean of Test formulation/Refernce formulation individual percent ratio was 104,56% for AUC0-48h and 55,73% for Cmax. The 90% for the confidence intervals (CI) were 94,80-115,32% e 44,73-69,42%, respectively. The values of half-life and Cmax for test formulation and reference formulation were 27,83;32,78h and 9,48;18,76ng/mL, respectively. The values of Tmax were 2,34;0,98h for the formulations test and reference respectively. Since the 90% CI for Cmax and AUC0-48h, were within the 80-125% interval proposed by the “Food and Drug Administration” and ANVISA, it was concluded that the two formulations of nimodipine 30mg tablets were not bioequivalent, according to the rate of absorption after single dose administration.Um método rápido, sensível e específico de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massa (LC-MS-MS) foi desenvolvido para determinar nimodipino (analito) em plasma humano usando dibucaína como padrão interno (PI). O analito (m/z 418,6 > 342,6) e o PI (m/z 344,2 > 271,0) foram extraídos de amostras de plasma através de extração líquido-líquido utilizando hexano-acetato de etila (1:1v/v). As corridas cromatográficas foram executadas utilizando-se uma coluna analítica Varian® Polaris C18 (3 micrômetros, 50 x 2,0 mm) e uma pré-coluna SecurityguardTM C18 (4,0 x 3,0 mm). A fase móvel consistiu de acetonitrila-solução de acetato de amônio 0,02 mol/L (80:20v/v). O método teve um tempo total de corrida de 4,5 min e uma curva de calibração linear que variou de 0,1-40 ng/mL. O limite de quantificação de 0,1 ng/mL. A precisão intra-ensaio para o limite de quantificação (LQ) foi 0,00% (lote 01), 5,71% (lote 02) e 5,27% (lote 03); para os controles de qualidade baixo (CQB), médio (CQM) e alto (CQA) os resultados foram respectivamente: 8,57, 0,81 e 1,37%. A precisão interensaio para o LQ e os CQB, CQM e CQA foram respectivamente de: 7% e 5,46, 4,12 e 3,37%. A exatidão intra-ensaio para o LQ foi 110, 96 e 104%; para CQB, CQM e CQA os resultados foram 100,67, 109,09 e 109,72% respectivamente. Os resultados da exatidão interensaio para o LQ, CQB, CQM e CQA foram respectivamente de: 103% e 102,89, 106,6, 109,69%. Este método foi aplicado para a avaliação do perfil farmacocinético do nimodipino administrado em 24 voluntários sadios participantes de um estudo de biodisponibilidade comparativa. A média geométrica da Formulação teste/Formulação referência para as porcentagens individuais foi 104,56% para ASC0-48h e 55,73% para Cmax. Os intervalos obtidos a partir do intervalo de confiança (IC) de 90% foram 94,80-115,32% e 44,73-69,42% respectivamente. Os valores de meia-vida e Cmax para as formulações teste e referência foram de 27,83;32,78h e 9,48;18,76ng/mL, respectivamente. Os valores de Tmax foram de 2,34;0,98h para as formulações teste e referência, respectivamente. Considerando o IC de 90% para Cmax e ASC0-48h dentro da variação de 80-125% proposto pelo Food and Drug Administration e ANVISA, as duas formulações de nimodipino 30mg não são bioequivalentes quanto à taxa de absorção (Cmax) após uma única administração