Detecção de hemopatógenos e seus vetores na população de cães no município de Itabirito – MG

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorAlgumas hemoparasitoses têm carrapatos como vetores e assumem elevada importância em medicina veterinária, além do potencial zoonótico de algumas dessas doenças. O objetivo deste trabalho foi detectar espécies de carrapatos presentes nos cães do município de Itabirito, Minas Gerais, uma área de transição de mata atlântica e cerrado, correlacionando com dados sanitários destes animais e detectar hemoparasitos em circulação nestes hospedeiros. Foram coletadas amostras de sangue e carrapatos de 100 cães, sendo nove cães domiciliados destinados à esterilização cirúrgica realizada no canil municipal, 20 cães de rua resgatados e encaminhados para o canil e 71 residentes no Bairro Portões – considerada uma região periurbana em contato com ambiente de mata e rural. Foi também realizado questionário com tutores de cães para levantar informações sanitárias de 78 animais. O teste de Qui-quadrado com significância de 5% foi realizado para correlacionar as respostas do questionário com os cães parasitados. As coletas foram realizadas entre os meses de outubro de 2017 a maio de 2018. Para a identificação dos carrapatos coletados, foi utilizado chaves taxonômicas de ixodídeos. Para a detecção de hemopatógenos dos gêneros Ehrlichia e Anaplasma foi realizada análise molecular em todas as amostras de sangue, por meio da reação em cadeia da polimerase nested (nPCR) e para os gêneros Hepatozoon, Babesia e Rangelia por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). Foi realizado sequenciamento nucleotídico para identificação específica dos agentes etiológicos encontrados. Além disso, o diagnóstico de Ehrlichia canis e Anaplasma phagocytophilum foi realizado por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), não sendo realizado este método para outras espécies de hemopatógenos. Foram coletados 210 espécimes de carrapatos. Destes, foram encontrados, 47 fêmeas, 68 machos, 62 ninfas e três larvas de Rhipicephalus sanguineus s. l; três machos e cinco fêmeas de Amblyomma aureolatum; oito ninfas, quatro fêmeas e oito machos de Amblyomma sculptum; e duas fêmeas de Rhipicephalus microplus. O parasitismo ocorreu em 3/9 (33,33%) dos cães destinados à esterilização cirúrgica, 11/20 (55%) dos cães provenientes de captura – ambos grupos provenientes do canil municipal - e 48/71 (67,60%) dos cães examinados no bairro Portões. Quanto aos dados sanitários de 78 dos cães, foi relatado que 60,26% dos cães passeavam com os tutores, porém somente 6,08% destes sempre utilizavam coleira com guia. Sobre o confinamento destes animais, 43,59% dos cães não possuíam barreiras físicas de contenção e 5,12% viviam em contato com áreas de mata. Quanto ao contato com outros animais, foi possível identificar 75 cães com este perfil, sendo: 29 tinham contato com outros cães; 28 com outros animais domésticos; e 18 com animais domésticos e silvestres. Não houve diferença significativa na prevalência de infestação entre esses grupos de animais. O controle da infestação por carrapatos era realizado em 57 cães, sendo o uso de banhos contendo antiparasitários o método mais comum. Em geral, os tratamentos não seguiam qualquer tipo de acompanhamento veterinário, sendo demonstrado que os cães expostos a tratamentos antiparasitários não diferiram estatisticamente em prevalência de infestação dos não expostos. Na análise molecular houve amplificação em 17/100 das amostras, com o gene alvo 16S rRNA para membros da família Anaplasmataceae com tropismo por granulócitos ou plaquetas (EG); em 9/100 das amostras para o gene de Piroplasma SSU rDNA; em 7/100 das amostras para o gene 18S rRNA de Hepatozoon spp.; em 5/100 das amostras para o gene dsb de Ehrlichia spp. e 1/100 amostra amplificou para o gene msp4 de A. phagocytophilum. Considerando os resultados do sequenciamento, foi possível identificar a circulação de E. canis, Anaplasma platys, Babesia vogeli e Hepatozoon canis. No diagnóstico sorológico utilizando a RIFI, foi possível detectar 19/100 amostras reativas para E. canis na diluição 1:40 e 6/100 para A. phagocytophilum, sendo: uma amostra na diluição 1:40, duas 1:80, duas 1:160 e uma 1:320. Conclui-se que há a circulação de hemopatógenos transmitidos por carrapatos na população de cães em Itabirito – MG e estes possuem contato com espécies domésticas e silvestres, o que predispõe a população humana ao contato com carrapatos de ambientes silvestres e possivelmente a hemoparasitoses carreadas por estes ixodídeos. Futuras pesquisas devem ser realizadas para definir com maior precisão a circulação de Rangelia vitalli e A. phagocytophilum. Além desses patógenos investigados nesta pesquisa, seria importante uma investigação sobre organismos do gênero Rickettsia, transmitidos por carrapatos e de grande importância em medicina veterinária e saúde pública.Some tickborne diseases play an important role in veterinary medicine in addition to the zoonotic potential of some of these diseases. This study aimed to detect the species of ticks present in dogs from Itabirito, Minas Gerais, a transition area of Atlantic forest and cerrado, connecting this with health data of these animals, and detect hemoparasites in these hosts. Blood samples and ticks were collected from 100 dogs. The origin of these animals were 9 domiciliated dogs which were sent to the castration program, 20 stray dogs rescue and sent to the municipal kennel of the county, and 71 domiciliated dogs in Portões, a neighborhood of Itabirito. The samples from these dogs were collected for convenience sampling. Also, were collected some health information about these dogs with a questionnaire direct to their tutors. In order to assess whether there was a statistical association between the data extract from questionnaire and tick infestation the chi-square test was applied with 5% confidence. The study collections were performed between October 2017 and May 2018. For the identification of the collected ticks, taxonomic keys of ixodids were used. For the detection of hemopathogens of the genera Ehrlichia and Anaplasma, molecular analysis was performed on all blood samples, using the nested polymerase chain reaction (nPCR) and for the genera Hepatozoon, Babesia and Rangelia using the polymerase chain reaction (PCR). Nucleotide sequencing was performed to specifically identify the etiologic agents found. In addition, the diagnosis of Ehrlichia canis and Anaplasma phagocytophilum was carried out through the indirect immunofluorescence reaction (RIFI), this method not being used for other species of hemopathogens. Were collected 210 tick specimens. From these, were found: 47 females, 68 males, 62 nymphs and three larvaes of the Rhipicephalus sanguineus s. l; three males and five females of the Amblyomma aureolatum; eight nymphs, four females and eight males of Amblyomma sculptum; and two females of Rhipicephalus microplus. The parasitism occurred in 3/9 (33.33%) refered for surgical sterilization, 11/20 (55%) dogs from capture – these both group of animals were analysed in municipality kennel - and 48/71 (67.60%) dogs examined in Portões neighborhood. About the 78 dogs health data, it was reported that 60.26% of the dogs walking with the tutors; however only 6.08% of these tutors always use leash and guide. Regarding the confinement of these animals, 43.59% of the dogs do not have any physical block barrier and 5.12% live in contact with forest area. Besides, other data reveal that 75 dogs had contact with others animals, as follow: 29 with others dogs; 28 with others domestic animals; and 18 with domestic and wild animals. There was no statitical significant difference in the prevalence of infestation between these groups of animals. The tick infestation control was performed in 57 dogs, and the most common method used was the bath with antiparasitic products. In general, the treatments of dogs did not follow any veterinary professional instructions and, it has been shown that dogs treated with antiparasitic drugs or other methods for tick control did not differ statistically in infestation prevalence when compared with the group without any treatment. In the molecular analysis 17% of samples were amplified using primers for 16S rRNA belongs to the granulocytic and trombocytic Anaplasmataceae members. For SSU rDNA gene from Piroplasm 9% of samples were amplified; 7% samples were amplified for the 18s rRNA gene for Hepatozoon spp.; 5% of samples were amplified for dsb gene from Ehrlichia spp., and 1% of samples were amplified using msp4 gene as target for A. phagocytophilum. By the serological diagnosis using IFAT were detected 19% reactive samples for E. canis in 1:40 dilution and 6% reactive samples for A. phagocytophilum in the following dilutions: 1 dog - 1:40; 2 dogs – 1:80; 2 dogs – 1:160; and 1 dog – 1:320. In conclusion, there was the circulation of tickborne diseases in this population of dogs in Itabirito – MG and these dogs have contact with wild and domestic species which predisposes the human population have contact with ticks from wild areas and possible to hemopathogens carried by these ticks. Future studies are need in order to better define the R. vitalli and A. phagocytophilum circulation. Beyond of these pathogens researched in this work, it will be necessary an investigation about Rickettsia genus organisms, because they represent great importance in veterinary medicine and public health