Caracterização molecular de fungos da Micoteca/UFPE e screening da produção de taxol

CAPESA Organização Mundial da Saúde (OMS) estima que até 2030 sejam previstos 27 milhões de casos incidentes de câncer, 17 milhões de mortes por câncer e 75 milhões de pessoas vivas, anualmente, convivendo com esta doença. No Brasil, as estimativas para o ano de 2012, válidas também para o ano de 2013, apontam a ocorrência de aproximadamente 518.510 novos casos de câncer, reforçando a magnitude do problema do câncer no país. Apesar da inserção de novos fármacos na terapia contra o câncer, vários tumores sólidos ainda não dispõem de tratamento adequado. Assim, é necessária a busca de novas alternativas medicamentosas para melhorar a eficácia do tratamento de doenças neoplásicas avançadas. Uma das principais áreas estudadas atualmente no mundo é a pesquisa de novos medicamentos com propriedades antitumorais. Microorganismos endofíticos podem ser entendidos como aqueles que vivem no interior das plantas, habitando, suas partes aéreas, como folhas e caules sem causar aparentemente nenhum dano a seus hospedeiros e conseguem viver nos tecidos internos das plantas e dispõem de uma riqueza bioquímica ainda não muito bem explorada. Os metabólitos secundários são compostos de baixo peso molecular, produzidos por fungos endofíticos em resposta às condições ambientais. Esses compostos apresentam potencial aplicação como os antibióticos. O objetivo do presente estudo foi avaliar seis gêneros da micoteca/URM quanto à produção do taxol. Os gêneros foram cultivados em meio BD (Batata Dextrose) por 72 horas em temperatura ambiente seguida de filtração a vácuo para extração do DNA. As reações de PCR foram realizadas com iniciadores e condições específicas para a amplificação do gene ITS do rDNA. Os produtos do gene ITS rDNA amplificados foram purificados e sequenciados. Os dados obtidos pelo sequenciamento do gene ITS rDNA foram analisados e comparados, pelo programas BLAST. Após a confirmação foram realizadas fermentações, seguidas da extração do metabólito secundário com acetato de etila. Os extratos foram analisados em Cromatografia em Camada Delgada (CCD) que mostrou um resultado satisfatório quando correlacionada a técnica Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC). Dessa forma, se faz necessário uma continuidade desse estudo para otimização do processo de fermentação e extração do produto bioativo.The World Health Organization estimates that by 2030 are provided 27 million incident cases of cancer, 17 million deaths from cancer and 75 million people alive each year living with this disease. In Brazil, the estimates for the year 2012, also valid for the year 2013 indicate the occurrence of approximately 518,510 new cases of cancer, reinforcing the magnitude of the cancer problem in the country. Despite the inclusion of new drugs in cancer therapy, several solid tumors still lack appropriate treatment. Thus, the search for new medicinal alternative is needed to improve the effectiveness of treatment of advanced malignancies. One of the main areas currently studied in the world is the search for new drugs with antitumor properties. Endophytic microorganisms can be understood as those who live within the plant, dwelling, its aerial parts such as leaves and stems without apparently causing any damage to their hosts and can live in the internal tissues of plants and have a biochemical wealth yet very well traveled. Secondary metabolites are low molecular weight compounds produced by endophytes in response to environmental conditions. These compounds have potential application as antibiotics. The aim of this study was to evaluate six genera of mycology collection / URM for the production of taxol. The genera were cultured in BD (Potato Dextrose) for 72 hours at room temperature followed by vacuum filtration for DNA extraction. PCR reactions were performed with specific primers and conditions for the gene amplification of the rDNA ITS. The STI gene amplified rDNA products were purified and sequenced. The data obtained by sequencing of the ITS rDNA were analyzed and compared by BLAST programs. After confirming fermentations were performed, followed by secondary metabolite extraction with ethyl acetate. The extracts were analyzed by Thin Layer Chromatography, which showed a satisfactory result when correlated Liquid Chromatography Technical High Efficiency. Thus, if a continuation of this study to optimize the process of fermentation and extraction of bioactive product is necessary