Construção de vetores de expressão não comercial contendo os genes L1 e quimeras de L1-E5 do Papilomavírus bovino tipo 1

CAPESO papilomavírus bovino (BPV) é um vírus altamente disseminado no mundo capaz de infectar rebanhos bovinos e provocar a papilomatose bovina, infecção que debilita a saúde do animal e pode resultar em morte. O Brasil possui o maior rebanho comercial do mundo, tendo grande destaque na exportação de carne bovina e na produção de leite, contudo a falta de dados precisos sobre a doença ainda são escassos o que dificulta o desenvolvimento de medidas de controle da infecção. Além disso, não existe uma vacina ou tratamento efetivo para papilomatose bovina. Deste modo, o presente trabalho teve como objetivo a produção de cassetes para expressão de diferentes antígenos de BPV1 em linhagens recombinantes de Leishmania tarentolae baseadas em um vetor de expressão não comercial. As quimeras foram construídas mediante PCR de fusão a partir do gene L1 selvagem clonado previamente no vetor de expressão pPGKΔ3. Através de eletroforese em gel de agarose foi observado a construção de fragmentos com tamanho aproximado de 1500 pb, indicando que houve a fusão dos dois fragmentos produzindo uma quimera no tamanho esperado. As construções foram clonadas no vetor pGEM-T Easy e a correta construção dos insertos foi confirmada por digestão e análise de sequenciamento de DNA. Posteriormente, as quimeras foram subclonadas no vetor de expressão pSPααNEO, sendo a clonagem novamente confirmada mediante digestão enzimática. Os resultados demonstram que os cassetes de expressão foram corretamente construídos e podem ser utilizados em estudos futuros de avaliação da expressão proteica das quimeras no sistema de Leishmania tarentolae.The bovine papillomavirus (BPV) is a highly disseminated virus in the world capable of infecting cattle herds and causing the bovine papillomatosis infection that weakens the health and can result in death of those animals. Brazil has the largest commercial herd in the world, with great emphasis on the export of beef and milk production, but the lack of accurate data on the disease are scarce which makes difficult the development of control measures for the disease. The present work aimed at the production of cassettes for the expression of different BPV1 antigens in recombinant Leishmania tarentolae lines based on a non-commercial expression vector. The chimeras were constructed using fusion PCR from wild L1 gene previously cloned into the expression vector pPGKΔ3. Using agarose gel electrophoresis it was observed construction fragments with approximate size 1500 bp, indicating that there was a fusion of the two fragments producing a chimera with the expected size. The constructions were cloned into pGEM-T Easy vector and the correct construction of the inserts was confirmed by digestion and DNA sequence analysis. Later, the chimeras were subcloned into the pSPααNEO expression vector, and the cloning was again confirmed by enzymatic digestion. The results demonstrate that the expression cassettes were correctly constructed and could be used in future studies evaluating the protein expression of the chimeras in the Leishmania tarentolae system