Study of serological techniques for diagnosis of Brucella abortus infection in buffaloes (Bubalus bubalis)

Tendo em vista a importância da bubalinocultura como fonte de proteína para o Brasil e também do Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e da Tuberculose para a evolução das cadeias produtoras de bovinos e bubalinos e, devido à escassez de estudos sobre o sorodiagnóstico da brucelose na espécie bubalina, procedimento no qual se apóia o processo de certificação de rebanhos livres e monitorados, o presente estudo objetivou comparar o desempenho de diferentes testes para o sorodiagnóstico da brucelose nessa espécie. Soros de 696 fêmeas bubalinas adultas foram submetidos aos testes qualitativos BPA, AATE, AAT e quantitativos: SRP, SLT, ELISAI, ELISAC, PF e ME e FC. Foi empregada, gold standard, a combinação de dois testes, FC e ME, considerando dois critérios: a) animais positivos para os reagentes na FC (título &ge; 20UI) e no ME (critério para fêmea vacinada) e como negativos os animais não reagentes na FC (título < 20UI) e no ME; b) animais positivos os reagentes na FC (título &ge; =20UI) e no ME (critério para fêmea não vacinada) e negativos os não reagentes na FC (título < 20UI) e no ME. Esta consideração foi necessária em função dos animais não apresentarem histórico de vacinação confiável o que interfere na determinação do ponto de corte a ser utilizado no teste ME de animais vacinados e não vacinados. Desta forma, numa primeira análise todos os animais foram avaliados no ME como vacinados e em outra como não vacinados. Com base nesses resultados, foi construída a curva ROC para todos os testes quantitativos (SRP, SLT, ELISAC, ELISAI e PF). Com os resultados dessa análise estabeleceu-se pontos de corte que otimizam os valores de sensibilidade e especificidade relativas para cada teste. Esses valores foram utilizados para o cálculo do índice de concordância Kappa para cada teste, incluindo os qualitativos. Concluiu-se que: a) os resultados dos estudos com os testes de ELISAC e PF em bovinos podem ser inferidos para bubalinos com razoável segurança; b) devem ser estabelecidos pontos de corte específicos para búfalos para o SLT, o SRP e o ELISAI; c) as melhores combinações de sensibilidade e especificidade relativas foram alcançadas pelo ELISAC, o PF, o BPA e o AAT; d) os melhores resultados de Kappa foram verificados para o ELISAC (kappa), PF, BPA, AATE e AAT; e) o BPA, AAT e AATE são os melhores testes para o sorodiagnóstico de triagem em bubalinos e o ELISAC e o PF são os mais promissores testes confirmatórios nessa espécie, já que ganhos adicionais de especificidade podem ser alcançados pelo aumento do ponto de corte.Considering the importance of the buffalo as a protein source in Brazil and the National Program of Brucelosis and Tuberculosis Control and Eradication for the evolution of the bovine and bubaline sector, and also due to the few number of studies on serological diagnosis of brucelosis in this specie, procedure that supports the process of certification of brucelosis free herds, the present study aimed to compare different serological tests for brucelosis diagnosis on buffaloes. Serum samples from 696 adult bubaline females had been analyzed to BPA, AATE, AAT (qualitatives), SRP, SLT, ELISAI, ELISAC, PF and ME and FC (quantitatives). The combination of two tests, FC and ME was used as reference, considering two criteria: a) positive animals: reactors for the FC (titer &ge; 20UI) and ME (vaccinated females), negative animals: no reactors for the FC (titer < 20UI) and ME (vaccinated females); b) positive animals: reactors for the FC (titer &ge; 20UI) and ME (not vaccinated females), negative animals: no reactors for the FC (titer < 20UI) and ME (not vaccinated females). It was necessary because was not possible to garantee the true vaccination status of the animals. The first step was performing the ROC analysis for all the quantitative tests (SRP, SLT, ELISAC, ELISAI and PF), and so the relative sensitivity and specificity and the Kappa were calculated for each test. Conclusions: a) the cut offs of ELISAC and PF tests proposed for bovines can be used for bubalines with reasonable security; b) specific cut offs for buffaloes to be used in SLT, SRP and ELISAI must be established; c) the best relative sensitivity and specificity had been reached by the ELISAC, PF, BPA and AAT; d) the best results of the Kappa had been reached by ELISAC (kappa), PF, BPA, AATE and AAT; e) BPA, AAT and AATE are the best screening diagnosis test for bubalines and ELISAC and PF are the most promising confirmatory tests for this species