Optimization of Eucalyptus globulus Labill. shoot multiplication in vitro

O objetivo deste estudo foi otimizar a multiplicação de brotações de Eucalyptus globulus Labill., por meio da definição do tamanho de explantes iniciais e de ajustes de nutrientes minerais do meio de cultura. Os meios de cultura utilizados foram o JADS (CORREIA et al., 1995), JADS modificado e o MS. Os tamanhos dos explantes foram definidos por suas massas frescas iniciais e classificados em T1 (0,1430g), T2 (0,2685g) e T3 (0,5180g). Inicialmente, os ajustes dos nutrientes minerais foram realizados de forma individual para cada nutriente e concentração utilizados: nitrogênio (NH4NO3), com suplementação de 45,0 (N1) e 65,0 (N2) mmol L-1; fósforo (KH2PO4), com suplementação de 1,0 (P1) e 2,0 (P2) mmol L-1; cálcio (CaCl2.2H2O), com suplementação 7,5 (Ca1) e 10,0 (Ca2) mmol L-1; e Magnésio (MgSO4.7H2O), com suplementação de 1,5 (Mg1) e 4,5 (Mg2) mmol L-1. Com base nos resultados iniciais, novos ajustes para nitrogênio e cálcio foram realizados: nitrogênio (NH4NO3) e cálcio (CaCl2.2H2O), com suplementação de 45,0 e 7,5 mmol L-1 (N1Ca1), respectivamente, e suplementação de 60,0 e 7,5 mmol L-1 (N2Ca1), respectivamente. Todos os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente aleatorizado (DIA); com 3 tratamentos e 4 repetições (tamanho do explante); 10 tratamentos e 3 repetições (ajuste inicial de nutrientes minerais) e 4 tratamentos e 6 repetições (ajuste final de nutrientes minerais). As características de crescimento, massas fresca e seca, porcentagem de massa seca e taxa de crescimento relativo (%) das brotações foram avaliadas semanalmente, durante os 28 dias de cultivo in vitro. As características de crescimento das brotações foram pouco afetadas pelo tamanho do explante inicial; no entanto, apresentaram deformações morfológicas em altas concentrações de nitrogênio. Todos os tratamentos apresentaram incrementos de massas seca e fresca. As porcentagens de massa seca foram menores nos tratamentos com maiores concentrações de nitrogênio (MS, N2 e N2Ca1). As maiores taxas de crescimento relativo foram observadas aos 7 dias de cultivo, e decresceram ao longo do período estudado. O meio de cultura JADS, apresentou crescimento das brotações considerado ótimo, porém não máximo. O meio de cultura MS apresentou crescimento das brotações fora dos padrões considerados ótimo e máximo. O meio de cultura JADS modificado, contendo 45,0 (N), 3,0 (P), 7,5 (Ca) e 3,0 (Mg), apresentou crescimento máximo das brotações e próximo ao ótimo.The aim of this work was to optimize Eucalyptus globulus Labill. shoot multiplication in vitro through the definition of the initial explant size and the adjustment of mineral nutrients in the culture media. The culture media utilized were JADS (CORREIA et al., 1995), modified JADS and MS. The explants fresh weight were 0.1430 g (T1); 0.2685 g (T2) and 0.5180 g (T3). Initially, the mineral nutrient and concentrations utilized were: nitrogen (NH4NO3) with 45.0 (N1) and 60.0 (N2) mmol L-1; phosphate (KH2PO4) with 1.0 (P1) and 2.0 (P2) mmol L-1; calcium (CaCl2.2H2O) with 7.5 (Ca1) and 10.0 (Ca2) mmol L-1 and magnesium (MgSO4.7H2O) with 1.5 (Mg1) and 4.5 (Mg2) mmol L-1. Based on the initials results, new adjustments were made for nitrogen and calcium, and the concentrations utilized were (NH4NO3) and (CaCl2.2H2O) with 45.0 and 7.5 mmol L-1 (N1Ca1) and 60.0 and 7.5 mmol L-1 respectively. All the tests were carried out in a completely randomized design; with 3 treatments and 4 replicates (explant size); 10 treatments and 3 replicates (initial adjustment of mineral nutrients) and 4 treatments and 6 replicates (final mineral nutrient adjustment). The shoot growth characteristics, fresh and oven dry weight, oven dry weight percentage and relative growth rate were evaluated weekly for 28 day culture period. The explant initial size had little effect on the shoot growth characteristics. All the treatments with mineral nutrient adjustments showed fresh and oven dry weight increase. The oven dry weight percentage were lower in the treatments with high nitrogen concentrations (MS, N2 and N2Ca1). The highest relative growth rates were observed at the 7th day evaluation and lowered along the culture period. The JADS culture medium showed shoot growths considered optimum but not maximum. The MS culture medium showed shoot growths not considered optimum or maximum. The adjusted culture media with 45.0 (N), 3.0 (P), 7.5 (Ca) and 3.0 (Mg) showed shoot growth considered maximum and almost optimum