Isolation and characterization of differentially expressed genes in human benign insulinomas

Os insulinomas são os mais comuns neoplasmas endócrinos pancreáticos, constituindo cerca de 17% de todos os tumores neuroendócrinos do trato digestivo. São tumores raros, que tem, como principal manifestação clínica, a hipoglicemia, a qual é ocasionada por secreção exagerada de insulina pelo tumor. Devido ao fato de serem tumores raros, o conhecimento das mudanças genéticas associadas à iniciação e progressão desses tumores é muito limitado. Em função disto, o objetivo deste trabalho é a identificação de genes diferencialmente expressos em insulinomas benignos humanos, visando o melhor entendimento dos mecanismos moleculares do processo tumorigênico dos insulinomas e a descoberta de novos alvos moleculares para terapia. Utilizando-se a plataforma de \"bioarrays\" CodeLink foram identificados 354 genes mais expressos nos insulinomas benignos, sendo que 16% estavam envolvidos em proliferação. Dentre estes genes foram escolhidos 6 genes para validação por \"Real-Time PCR\", onde os genes SPARCL1, PRSS11 STAT4, ECRG4, ASCL1 confirmaram sua expressão diferencial nos tumores, porém a diferença do gene IGFALS não foi estatisticamente significativa. Através da técnica \"Representational Difference Analysis\", isolou-se o clone FLJ13072, como super-expresso nos insulinomas benignos quando comparado à ilhotas normais, sendo que a seqüência protéica putativa deste gene apresenta um domínio conservado de helicase, podendo estar envolvido em eventos de transcrição, tradução, reparo de DNA e remodelamento de cromatina. Uma das dificuldades encontradas no estudo dos insulinomas é a falta de linhagens celulares humanas. Por esta razão, iniciou-se o estabelecimento de culturas primárias e precoces de insulinomas humanos visando sua utilização como modelos celulares para futuros estudos funcionais dos genes identificados.Insulinomas are the most common pancreatic endocrine neoplasms, comprising around 17% of all neuroendocrine tumors of the digestive tract. These rare tumors have hypoglycemia as the main clinical manifestation, caused by over secretion of insulin by the tumor. Based on that, the objective of this work is the identification of differentially expressed genes in human benign insulinomas, aiming at the better understanding of the molecular mechanisms of their tumorigenic process and the discovery of new molecular targets for therapeutics. Using the CodeLink bioarrays platform (GE Healthcare) 354 genes upregulated in human benign insulinomas were identified, among which, 16% are involved in cell proliferation. From these genes, 6 were chosen for validation by Real Time PCR, where SPARCL1, PRSS11, STAT4, ECRG4 and ASCL1 were shown to be upregulated in all benign tumors, however the expression difference of IGFALS gene were not statistically significant. Using the RDA (Representational Difference Analysis) methodology, the unknown gene FLJ13072 was shown to be upregulated in benign isulinomas when compared to normal pancreatic islets. The putative protein product from this gene has an helicase domain, being possibly involved in processes like transcription, translation, DNA repair and chromatin remodeling. An important drawback for the study of insulinomas is the lack of human cell lines. Because of that, the establishment of early primary cultures of human insulinomas was initiated, aiming at its use as a cell model for future functional studies of the genes identified