Acoustic characterization and pattern of evolution of the advertisement call of Neotropical tree frogs of Scinax clade (Hylidae): taxonomic, systematic and macro-evolutionary implications.

O canto de anúncio dos anuros apresenta importância fundamental como mecanismo primário de isolamento reprodutivo. Em decorrência disto, estes cantos têm se mostrado altamente valiosos para a determinação da identidade das espécies, para assegurar uma diagnose confiável, e adicionalmente, têm contribuído para revelar espécies crípticas nos mais variados complexos de espécies. Apesar de alguns estudos na literatura terem investigado o padrão de evolução do canto com uma abordagem comparada incorporando a estrutura filogenética do grupo estudado, apenas na última década têm emergido os primeiros estudos utilizando uma abordagem filogenética para a investigação da evolução do canto em anuros. Pererecas do gênero Scinax Wagler, 1830 são um dos mais abundantes e conspícuos grupos de anuros dos Neotrópicos, sendo reconhecido atualmente como o segundo gênero mais especioso dentre os hilídeos (Hylidae), i.e. 111 spp. descritas. O monofiletismo, a ampla distribuição geográfica, riqueza de espécies, heterogeneidade de ambientes ocupados e a variação morfológica e acústica das espécies de Scinax faz deste um clado interessante para o estudo da evolução da comunicação acústica. No presente estudo os principais objetivos foram contribuir com a taxonomia e zoogeografia do gênero Scinax através da descrição detalhada dos caracteres do canto de anúncio de espécies dos clados S. ruber e S. catharinae, melhorando assim a caracterização biológica (diagnose) destas espécies, e identificar e caracterizar a variação acústica intra-específica para parte das espécies estudadas. Como consequência desta primeira etapa do trabalho, era esperada a produção de uma base de dados acústicos de alta qualidade, de maneira padronizada e detalhada para seu uso subsequente em estudos comparados utilizando uma abordagem comparada filogenética (i.e. segunda etapa do trabalho). Espécies/populações de Scinax foram acusticamente amostradas em 60 localidades (dados inéditos), concentrando-se principalmente nas regiões sudeste, central e sul do Brasil, dentro dos biomas Mata Atlântica e Cerrado. No total, foram analisados cerca de 3.500 cantos de anúncio, pertencentes a 387 indivíduos - 332 indivíduos do clado Scinax ruber e 55 indivíduos do clado S. catharinae (grupo S. catharinae), a maior parte consistindo de dados inéditos (aprox. 75% dos dados). A análise destes dados permitiu a caracterização acústica detalhada de 40 espécies nominais do clado Scinax (i.e. 32 spp. clado S. ruber; 8 spp. clado S. catharinae) - o que corresponde a 36% das espécies atualmente conhecidas do gênero. Diferenças inter-específicas reportadas nas características do canto de anúncio destas espécies forneceram suporte robusto para a diagnose acústica de quase todas as espécies estudadas. Adicionalmente, esta amostragem acústica intensiva para o gênero revelou elevados níveis de diversidade críptica em Scinax, i.e. 33 espécies não descritas. A maior parte dessa diversidade críptica encontrada está oculta sob os nomes S. squalirostris (7 espécies crípticas) e S. fuscomarginatus (4 espécies crípticas). Desta forma, a análise acurada e detalhada dos dados acústicos do canto de anúncio revelaram um profundo impacto sobre a taxonomia do grupo. A base de dados interespecíficos de alta qualidade produzidos e a disponibilidade de hipóteses filogenéticas para Scinax na literatura permitiram a investigação da evolução dos sinais acústicos no grupo, e.g. reconhecer e diferenciar a magnitude de fatores filogenéticos sobre a diversificação inter-específica do canto de anúncio, avaliar se caracteres acústicos associados a morfologia ou comportamento-fisiologia apresentam diferentes níveis de sinal filogenético e investigar o padrão evolutivo dos caracteres acústicos (canto de anúncio) e do CRC em Scinax através do procedimentos de otimização/mapeamento. Estas análises conduzidas revelaram altos níveis de sinal filogenético para a maioria dos caracteres do canto de anúncio investigados (i.e. 16 de 21 caracteres, com ? não diferindo de 1 nesses caracteres), sobre uma topologia de 31 spp. do gênero. A intensidade elevada de sinal filogenético encontrado foi similar aos níveis observados em caracteres morfológicos na literatura, não confirmando a hipótese de que caracteres comportamentais seriam mais lábeis em relação a caracteres morfológicos. As análises de mapeamento de caráter evidenciaram dois padrões principais de canto de anúncio em Scinax, cada padrão associado a um dos grandes clados do grupo, além fornecerem evidência robusta para o suporte de sinapomorfias acústicas para cada clado.The advertisement call of frogs presents fundamental importance as a primary mechanism of reproductive isolation. As a result, these calls have proven to be highly valuable in determining the species identity, to ensure reliable diagnosis, and additionally, the advertisement calls has helped to reveal cryptic species in various species groups. Although some studies in the literature have investigated the pattern of evolution of the calls with a comparative approach incorporating information about the group phylogeny under study, only in the last decade studies using a phylogenetic approach to investigate the evolution of anurans calls have emerged. Treefrogs of the genus Scinax Wagler, 1830 is one of the most abundant and conspicuous groups of frogs in the Neotropics, actually being recognized as the second most specious genus among the hylids (Hylidae), i.e .111 spp described. The monophyletism, wide geographic distribution, richness of species, heterogeneity of environments occupied and the morphological and acoustic variation makes Scinax an interesting group to the investigation of the evolution of acoustic communication. The main aims of the present study were to contribute to the taxonomy and zoogeography knowledge of the genus Scinax through a detailed description of the characters of the advertisement calls of the species from the clades S. ruber and S. catharinae. Thus, it was possible make better the biological characterization (diagnosis) of these species and allowed to identify and characterize the intra-specific acoustic variation to part of the genus. As a consequence, the first part of this study permitted to produce a high-quality acoustic database, in a detailed and standardized manner to being used in a subsequent comparative phylogenetic approach (second part of the study). Species/populations of Scinax were acoustically sampled at 60 locatilies (original data), mainly concentrated in the southeastern, central, and southern of Brazil, in Atlantic Rain forest and Cerrado biomes. In total, about 3,500 advertisement calls were analyzed from 387 individuals (332 of Scinax ruber clade; and 55 of S. catharinae clade) - the most part consisting of new data (ca. 75%). Data analysis allowed the detailed acoustic characterization of 40 nominal species of the clade Scinax (i.e. 32 spp. of S. ruber clade; 8 spp. of S. catharinae clade), what correponds to 36% of currently known diversity of the genus. Inter-specific differences in the reported characteristics of the advertisement calls provided robust support to acoustic diagnosis for almost all species. Additionally, this intensive acoustic sampling to the genus revealed high levels of cryptic diversity in Scinax, i.e. 33 undescribed species. Most part of these cryptic diversity were under the nominal species S. squalirostris (7 cryptic species) and S. fuscomarginatus (4 cryptic species). Thus, accurate and detailed analysis of acoustic data of the advertisement call revealed a profound impact on the group taxonomy. The interspecific high-quality database here generated, and the availability of phylogenetic hypotheses for Scinax in the literature allowed the investigation of the evolution of acoustic signals in the genus, e.g. to recognize and differentiate the magnitude of phylogenetic factors on the inter-specific diversification of advertisement calls; to assess if acoustic characters related to morphology or behavior-physiology present different levels of phylogenetic signal; and to investigate the pattern of evolution of acoustic characters (advertisement call) and SVL in Scinax through optimization/mapping procedures. These analyses revealed high levels of phylogenetic signal for most of the characters of the advertisement call investigated (i.e. 16 of 21 characters with ?=1), based on a topology of 31 terminals species. The high intensity of phylogenetic signal found was similar to the levels observed for morphological characters in the literature, what is in disagree with the hypothesis that behavioral characters would be more labile than morphological characters. The character mapping analysis revealed two main patterns in Scinax, each one associated with one of the main clades of the genus, besides provide strong evidence to support acoustic synapomorphies for each clade