Cárie severa na infância: avaliação da estrutura de comunidades bacterianas e perfil de sensibilidade a antimicrobianos

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2013.O objetivo desta pesquisa foi avaliar a estrutura da comunidade bacteriana do biofilme de dentes decíduos em pacientes com cárie severa na infância através da análise de PCR-DGGE e verificar a ação de agentes antimicrobianos sobre bactérias prevalentes nesse tipo de lesão. Foram coletadas amostras de biofilme bacteriano provenientes de dentes hígidos (G1), com lesão de cárie de esmalte (G2) e dentina (G3) de 23 crianças entre 1 ? 5 anos de idade. O DNA metagenômico foi extraído pelo o método de CTAB, a qualidade do DNA foi verificada em gel de agarose seguida de eletroforese, e a quantificação e pureza foi determinado espectrofotometricamente. Em seguida, a região V3 do gene rDNA 16S foi amplificada utilizando-se o DNA extraído e os iniciadores universais BA 338fGC e UN518r. A quantidade de amplicons foi analisada por PCR-DGGE utilizando gel de acrilamida:bisacrilamida seguida de eletroforese. A aquisição das imagens foi realizada com fotodocumentador. Foram obtidos 45 amplicons, nos quais foi observado que as estruturas de comunidades bacterianas dos grupos estudados apresentaram diferenças entre os pacientes e entre os grupos de dentes, onde houve um maior numero de amplicons nosdentes do G2 e G3 quando comparados ao G1 (p 3log10 (99,9%) para todas as bactérias em uma aplicação de ozônio = 20ppm para S. mutans e = 200ppm para L. acidophilus e E. faecalis, enquanto que a associação de NaF-CHX foi mais eficaz (pAbstract : The objective of this research was to evaluate the structure of bacterial community from biofilms of deciduous teeth in patients with early childhood caries through the analysis of PCR ? DGGE; verify the action of antimicrobial agents on bacteria related. Biofilm samples were collected from intact teeth (G1) , with enamel caries (G2) and dentin caries (G3) of 23 children aged 1-5 years. The metagenomic DNA was extracted by the CTAB method, the quality of the DNA was checked by electrophoresis, while quantification and purity were determined spectrophotometrically. Then, the DNA extracted associated to universal primers (BA 338fGC UN518r) were used to amplify the V3 region of the gene 16S rDNA. The amount of fragments was analyzed by PCR- DGGE using gel Acrylamide : bisacrylamide followed by electrophoresis. A total of forty-five amplicons were obtained, it was observed that the structures of bacterial communities of both groups showed differences between patients and between groups of teeth , where there was a higher number of amplicons in the biofilm of G2 and G3 compared to G1 ( p 3log10 ( 99.9 % ) for all bacteria on an application of ozone = 20ppm for S. mutans and = 200 ppm for L. acidophilus and E. faecalis , while the combination of CHX - NaF was effective (p