Análise fenotípica dos mecanismos de imunorregulação induzidos pelas células TREGSCD4+CD25HIGHFOXP3+ na Hanseníase

A hanseníase, causada pela bactéria não cultivável Mycobacterium leprae (M. leprae), possui manifestações clínicas variadas, que estão associadas com as respostas imunes do hospedeiro. A dicotomia entre as funções de células T e anticorpos são discutidas com base nas informações atuais sobre citocinas, subconjuntos de células T e células T reguladoras. As células T reguladoras CD4+CD25highFOXP3+ (TREGS) apresentam capacidade para controlar a resposta imune pela supressão de células apresentadoras de antígenos e de células T efetoras. Alguns mecanismos induzidos por essas células foram propostos na infecção pela hanseníase. Entretanto, a importância dos mecanismos de imunorregulação das células TREGS ainda não foi completamente estabelecido nessa doença. No presente estudo objetou-se avaliar a expressão de marcadores de imunorregulação induzidos por células TREGS, presentes no sangue de pacientes nas formas clínicas polares da hanseníase, contatos domiciliares e indivíduos não infectados. Trata-se de estudo transversal, analítico, com abordagem quantitativa. Os sujeitos do estudo foram casos novos de hanseníase diagnosticados no Ambulatório de Dermatologia Sanitária do Hospital Eduardo de Menezes, contatos domiciliares e indivíduos não infectados como grupo controle. Todos os pacientes foram estudados antes do tratamento e foram agrupados de acordo com a classificação de Ridley e Jopling. A quantificação de células TREGS e ensaios de imunofenotipagem foram realizados em células mononucleares do sangue periférico de pacientes com as formas polares da hanseníase, contatos domiciliares e controles. Análises da quantificação de células TREGS e dos ensaios de imunofenotipagem foram realizados por meio da citometria de fluxo e do software FlowJo. Os testes estatísticos ANOVA, teste de normalidade de Shapiro-Wilk e os testes de Kruskal-Wallis, MannWhitney e correlação de Spearman foram realizados nesse estudo e analisados no software SPSS versão 18.1 e no programa Cytoscape, respectivamente. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Minas Gerais e o termo de consentimento foi obtido de todos os participantes. Treze casos novos de hanseníase, 14 contatos domiciliares e 15 controles participaram desse estudo. A maioria dos pacientes foi agrupa na forma clínica polar VV (4 mulheres e 4 homens; idade média = 52 anos) ou como contatos domiciliares de pacientes com a forma clínica polar VV (5 mulheres e 5 homens; idade média = 25 anos). A frequência de células TREGS foi maior na forma clínica polar VV. Na análise dos mecanismos de imunorregulação induzidos pelas células TREGS observou-se que, na forma clínica polar TT, a supressão de células T efetoras pode estar relacionada com a ação dos mecanismos de citocinas inibitórias (IL-10), de anergia de APCs (CTLA-4) e de interrupção de via metabólica (CD39-CD73). A autoapoptose de células TREGS, presente nessa forma clínica polar, pode estar relacionada com o controle da resposta imune exacerbada. Entretanto, na forma clínica polar VV, a ação do mecanismo de indução de apoptose pela via CD95L e PD-1, associada com a maior frequência de células TREGS nessa forma clínica polar, pode estar relacionada com a indução de apoptose de células efetoras, contribuindo, deste modo, para a viabilidade do bacilo e persistência da doença.Leprosy, caused by the non-culturable bacteria, Mycobacterium leprae (M. leprae), has several clinical manifestations, which are associated with the hosts immune responses. Dichotomy among the functions of T cells and antibodies is discussed based on current information on cytokines, subsets of T cells and regulatory T cells. Regulatory T cells CD4+CD25highFOXP3+ (TREGS) have been shown to be able to control the immune response by suppressing antigen-presenting cells and effector T cells. Some mechanisms induced by these cells have been proposed in leprosy infections. Nevertheless, the importance of immunoregulatory mechanisms of regulatory T cells still has not been completely established for this disease. The objective of the present study is to evaluate the expression of immunosuppression markers induced by regulatory T cells, present in the blood of patients with polar clinical forms of leprosy, household contacts and uninfected individuals. It is a cross-sectional analytical study with a quantitative approach. Individuals in the study were new cases of leprosy diagnosed at the Sanitary Dermatology Outpatient Service of Hospital Eduardo de Menezes, household contacts and uninfected individuals as control group. All patients were studied before treatment and were grouped according to Ridley and Jopling classification. Regulatory T cells have been quantified and immunophenotyping assays have been carried out in peripheral blood mononuclear cells with polar forms of leprosy, household contacts and controls. Quantification analyses of Regularoty T cells, immunophenotyping assays were performed by means of flow cytometry and of FlowJo software. Statistical tests such as ANOVA, Shapiro-Wilk normality test and Kruskal-Wallis, Mann-Whitney tests and Spearman correlation test were carried out in this study and analyzed using the SPSS software version 18.1 and the Cytoscape program, respectively. The study was approved by the Committee of Ethics in Research of Universidade Federal de Minas Gerais and the consent term was obtained from all participants. Thirteen new cases of leprosy, 14 household contacts and 15 controls took part in this study. Most patients were grouped in the LL (Lepromatous leprosy) polar clinical form (4 females and 4 males, average age = 52 years) or in household contacts with the clinical form (5 females and 5 males; mean age = 25 years). Regulatory T cells were more frequent in the LL polar clinical form. In the analysis of the Regulatory T cells induced immunnoregulation mechanisms, the suppression of effective T cells would be related to inhibiting mechanisms of cytokine (IL-10), to anergy induced by antigen-presenting cells (CTLA-4) and to the metabolic pathway interruption (CD39-CD73). Self-apoptosis of regulatory T cells, present in the polar clinical form, would be related to the control of an exacerbated immune response. Nevertheless, in the LL polar clinical form, the action of the apoptosis induction mechanism via CD95L and PD-1, associated with a higher frequency of regulatory T cells in this polar clinical form, would be related to apoptosis induction of effector cells, thus contributing to the viability of the bacillus and the persistence of the disease