Validação de metodologia analítica por UPLC/MS-MS para avaliação da presença de resíduos de antimicrobianos em músculo de frangos de corte após tratamento

Com o objetivo de avaliar a presença e os níveis de resíduos de antimicrobianos no músculo de frangos de corte, por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (UPLC/MS-MS), foram utilizados 320 frangos de corte da linhagem Cobb alojados em oito boxes experimentais contendo 40 aves cada. Os tratamentos, definidos de acordo com o antimicrobiano fornecido às aves via água de beber, foram os seguintes: A) aves não receberam medicamento (controle); B) aves que receberam enrofloxacina na água de beber; C) aves que receberam sulfaquinoxalina na água de beber e D) aves que receberam oxitetraciclina na água de beber. Os medicamentos foram fornecidos aos animais nos dias 32, 33 e 34 de criação. As aves dos grupos B, C e D foram abatidas nos dias 32, 33, 34, 35, 36, 38, 40, 42, 44 e 46 dias de criação, enquanto as aves do grupo A, foram abatidas nos dias 35, 36, 38, 40, 42, 44 e 46 para coleta de amostras do músculo do peito e da coxa para avaliação de resíduos dos antimicrobianos utilizados. A metodologia analítica por UPLC/MS-MS foi validada e apresentou alta seletividade, linearidade (coeficiente de correlação superior a 0,99), exatidão adequada, com recuperações médias variando entre 86,40 e 107,08%, limites de detecção (LD) entre 1,76 e 6,71, limites de quantificação (LQ) variando de 5,33 a 20,34, limite de decisão (CC) e capacidade de detecção (CC) variando de 111,34 a 120,86 e de 122,67 a 141,72, respectivamente. Os resultados das análises das amostras de músculo dos frangos de corte demonstraram a presença de resíduos dos antimicrobianos, em concentrações acima dos limites máximos de resíduos (LMR) de cada droga, até o 36º de criação das aves, isto é, dois dias após o término do tratamento dos animais. A partir do 38º dia de criação das aves, as concentrações de resíduos observadas foram inferiores ao limite de quantificação do método para os medicamentos avaliados. Foi concluído que o método de UPLC/MS-MS apresenta as características de desempenho necessárias, sendo adequado para a pesquisa de resíduos de enrofloxacina, ciprofloxacina, sulfaquinoxalina e oxitetraciclina em músculo de frangos de corte. Além disso, todos os antimicrobianos utilizados são rapidamente metabolizados pelos frangos de corte, pois, quatro dias após a retirada dos medicamentos, as concentrações de resíduos encontradas foram inferiores ao limite de quantificação do método para todos os analitos estudados.In order to evaluate the presence and the levels of antimicrobial residues in the broiler chickens muscle, by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC/MS-MS), were used 320 broiler chickens from Cobb line, that were housed in 8 units (pens) containing 40 birds each. The treatments, were defined according to the antimicrobial provided to broilers via drinking water, and they were as follows: A) birds received no drug (control); B) birds that received enrofloxacin in the drinking water; C) birds that received sulfaquinoxaline via drinking water and D) birds that received oxytetracycline in drinking water. The drugs were provided to the animals on days 32, 33 and 34 of rearing. The birds of groups B, C and D were slaughtered on days 32, 33, 34, 35, 36, 38, 40, 42, 44 and 46 days of rearing, while birds in group A were slaughtered on days 35, 36 , 38, 40, 42, 44 and 46 to collect thigh and breast muscle samples for evaluation of antimicrobial residues used. The analytical method by UPLC/MS-MS was validated and showed high selectivity, linearity (correlation coefficient greater than 0.99), adequate accuracy, with recoveries ranging from 86.40 to 107.08%, limits of detection (LOD) from 1.76 to 6.71, limits of quantification (LOQ) ranging from 5.33 to 20.34, decision limit (CC) and detection capability (CC) ranging from 111.34 to 120.86 and the from 122.67 to 141.72 respectively. The results of the analysis of the broiler chicken muscle samples showed the presence of residues of antimicrobials at concentrations above the maximum residue levels (MRL) of each drug until the 36th day of rearing of the birds, that is, two days after the discontinuation of the medication. At the 38th day of rearing, the residue levels found were below the quantification limit of the method for the tested analytes. It was concluded that the UPLC/MS-MS method has the performance characteristics adequate and is suitable for detecting residues of enrofloxacin, ciprofloxacin, sulphaquinoxaline and oxytetracycline in broiler chicken muscle. Also, the residues of all studied antimicrobials are rapidly metabolized from broiler muscles, because after four days of withdrawal period, the levels found were lower than the limit of quantification of the method for the studied analytes