Analíse do papel do fator sigma C na resposta de Corynebacterium pseudotuberculosis a diferentes condições de estresse ambiental

Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva, causadora da linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. Para causar uma infecção bem sucedida, este patógeno intracelular facultativo precisa responder de modo eficiente às alterações do ambiente extracelular, sendo capaz de sobreviver às condições adversas encontradas no organismo hospedeiro. Um dos principais mecanismos utilizados por bactérias patogênicas para alcançar este objetivo consiste na ativação transitória de genes específicos de resposta aos estresses ambientais extracelulares por fatores sigma alternativos da RNA polimerase. Com o seqüenciamento do genoma de C. pseudotuberculosis pela Rede Genoma de Minas Gerais e Rede Paraense de Genômica e Proteômica, foi possível identificar sete fatores sigma alternativos nesta bactéria: os fatores sigma B, C, D, E, H, K e M. Dentre estes, destaca-se o fator sigma C, o qual tem sido associado à virulência em Mycobacterium tuberculosis, e cujo gene se encontra em uma ilha de patogenicidade em C. pseudotuberculosis. Neste contexto, nosso grupo de pesquisa tem se dedicado ao estudo do papel dos fatores sigma alternativos de C. pseudotuberculosis na resposta a diferentes condições de estresse in vitro e na virulência da bactéria. Neste trabalho, foi construída uma linhagem de C. pseudotuberculosis deficiente para o fator sigma C, utilizando um plasmídeo suicida, e foi avaliada a resistência desta linhagem aos estresses oxidativo, ácido, osmótico e térmico in vitro, através da comparação das diferenças no crescimento relativo e na viabilidade relativa das bactérias expostas às condições de estresse em relação às bactérias crescidas sob condições normais, entre os tempos sucessivos de exposição das linhagens 1002 selvagem e mutante para o fator sigma C a cada agente gerador de estresse. Não foi observada uma diferença significativa na susceptibilidade da linhagem mutante para o fator sigma C ao estresse ácido em relação à linhagem 1002 selvagem. Contudo, foi verificado que esta linhagem é significativamente mais susceptível aos estresses oxidativo, osmótico e térmico do que a linhagem 1002 selvagem, indicando que o fator sigma C deve desempenhar um papel importante para a resposta da bactéria a estas condições de estresse, e possivelmente, para a sua sobrevivência no meio ambiente e no interior do hospedeiro e para a sua virulência.Corynebacterium pseudotuberculosis is a Gram-positive bacterium, which causes caseous lymphadenitis in sheep and goats. To cause a successful infection, this facultative intracellular pathogen needs to respond efficiently to the changes in the extracellular environment, being able to survive faced with the harsh conditions found in the host organism. One of the main mechanisms used by pathogenic bacteria to achieve this goal is the transient activation of specific genes in response to extracellular environmental stresses by alternative sigma factors of RNA polimerase. After the sequencing of the genome of C. pseudotuberculosis by Rede Genoma de Minas Gerais e Rede Paraense de Gen?ica e Prote?ica, it was identified seven alternative sigma factors in this bacterium, the sigma factors B, C, D, E, H, K and M. Between these, the sigma factor C stands out, which has been linked to virulence in Mycobacterium tuberculosis, and whose gene is located in a pathogenicity island in C. pseudotuberculosis. In this context, our research group has been studying the role of the alternative sigma factors of C. pseudotuberculosis in response to different stress conditions in vitro and in virulence of the bacterium. In this work, we constructed a strain of C. pseudotuberculosis deficient for the sigma factor C, using a suicide plasmid, and evaluated the resistance of this strain to oxidative, acid, osmotic and heat stresses in vitro, by comparing the differences in relative growth and relative viability of bacteria exposed to stress conditions in relation to bacteria grown under normal conditions, between the successive times of exposure of 1002 wild strain and the strain mutant for the sigma factor C for each stress generator agent. There was no significant difference in the susceptibility of the strain mutant for the sigma factor C for the acid stress in relation to the 1002 wild strain. However, it was found that this strain is significantly more susceptible to oxidative, osmotic and heat stresses than the 1002 wild strain, showing that the sigma factor C should play an important role for the bacteriums response to this stress conditions, and possibly, for its survival in the environment and in the host and for its virulence