Lentivirus de pequenos ruminantes: caracterização genética e antigênica de isolados de caprinos e ovinos do Brasil

Com o objetivo de isolar e caracterizar por análise filogenética e antigênica os lentivirus de pequenos ruminantes (LVPR), espécimes de 44 caprinos (Plexo coróide, MSC, PBMC e LBA) e soros de caprinos (n=1882) e de ovinos (n=67) oriundos das regiões NE, SE e SU do Brasil foram coletados entre 2009 a 2011. DNA proviral de 26 isolados de LVPR (dentre os 42 isolamentos), de sangue (caprinos=6 e ovinos=2) e de sete isolados de LVPR obtidos em 1995 foram amplificados por nested PCR em dois fragmentos do gene env compreendendo a região V1V2 (394p) e V4V5 (608pb) e uma região da matriz e capsídio do gene gag (990pb), seguido de sequenciamento de nucleotídeos. A caracterização antigênica dos soros foi avaliada por Elisa recombinante constituído por domínios imunodominantes das proteínas estruturais (MA, CA e SU baseado nos subtipos B1 e A13). A caracterização genética e antigênica LVPR evidenciou, principalmente, a presença do subtipo B1 nos rebanhos caprinos, apesar de também ter sido encontrado em rebanhos de ovinos. Adicionalmente, encontrou-se o genótipo A em isolados de caprinos. A classificação de LVPR de ovinos no genótipo B e de caprinos no grupo A evidenciou a transmissão de MVV e CAEV interespécie entre caprinos e ovinos no Brasil. Análise de aminoácidos (V4/V5) identificou recombinação ou co-infecção ocorrendo em caprinos, dentre os quais, dois vírus apresentaram características de ambos MVV e CAEV, enquanto um outro vírus apresentou uma inserção de novo motivo na região imunogênica da proteína de superfície (V4). Estes resultados demonstram a diversidade genética e antigênica de estirpes de LVPR circulantes no Brasil e confirma a necessidade de considerar todos os genótipos virais em antígenos utilizados em testes sorológicos, a fim de evitar diagnósticos incorretos e aumentar a acurácia dos mesmos nos programas de controles de LVPR.With the goal to isolate and characterize by phylogenetic and antigenic analysis the small ruminant lentiviruses (SRLV), choroid plexus; MSC, PBMC and BAL samples from 44 goats and 1882 goat and 67 sheep serums from Northeast, Southeast and South of the Brazil were collected between 2009 at 2011. Proviral DNA from 32 SRLV isolates and from blood (6 goats and 2 sheep) were amplified by nested PCR PCR in two fragments spanning either the V1V2 (394pb) or V4V5 (608pb) of env region, and one gag fragment (990pb) containing partial MA and entire CA coding sequence, followed by nucleotide sequencing. The antigenic response of sera ware evaluated against multiepitope recombinant antigens with immunodominant domains of structural proteins (CA, MA, SU, based on the A13 and B1 subtypes). LVPR were isolated from 42 goats, and showed no association between LVPR isolation and clinical signs, age, breed or production type. LVPR genetic and antigenic characterization showed mainly the B1 subtype in dairy goats, despite having also been found in sheep. Additionally, the genotype A was found in goats. LVPR classification of sheep in B and goat in A-groups evidenced the MVV and CAEV interspecies transmission in Brazil. Amino acid analysis (V4/V5) identified coinfection or recombination occurring in goats, among which two discordant virus clusters corresponding to group A and B group, demonstrating that this goats was dually infected, while another virus showed a new motive inserted in the protein surface immunogenic region (V4 domain). These results demonstrated the genetic and antigenic diversity of Brazilian SRLV strains circulating in country, and confirm the necessity to consider all the viral genotypes in antigens used to serological tests, in order to prevent misdiagnosis and increase the accuracy of these in the SRLV controls program