Avaliação da resposta imune e proteção induzidas pela cepa CL-14 de Trypanosoma cruzi, geneticamente modificada para expressar o antígeno A2 de Leishmania L. infantum

As Leishmanioses constituem um grupo de doenças infecciosas que afetam predominantemente países subdesenvolvidos. Dentre as manifestações clínicas da doença, a leishmaniose visceral é a forma mais grave, sendo classificada como a segunda causa de mortalidade, dentre as doenças tropicais. Dada a gravidade e complexidade desse negligenciado problema de saúde pública, torna-se necessária a pesquisa de vacinas capazes de proteger as populações em risco. As vacinas desenvolvidas a partir de organismos vivos atenuados mimetizam o curso natural da infecção, oferecendo um amplo repertório antigênico ao sistema imune do hospedeiro e induzindo uma resposta duradoura e protetora. No presente estudo, a cepa não-virulenta CL-14 de Trypanosoma cruzi foi transfectada com o vetor integrativo pROCKNEO contendo o gene sintético da proteína A2 (729pb), cujo caráter imunogênico e capacidade protetora já haviam sido demonstrados em diversos estudos. A expressão de A2 na cepa CL-14 foi confirmada por PCR, Western Blotting e imunofluorescência. Camundongos BALB/c foram imunizados intraperitonealmente com 107 parasitas transgênicos por protocolo prime-boost homólogo. O soro e os esplenócitos dos animais foram coletados e testados por ELISA e ELISPOT, em relação à produção anticorpos anti-A2 e de IFN-. Os resultados foram comparados com os obtidos com proteína A2 recombinante (A2r), associada a MPL-A ou Alúmen + CpG. Os animais foram então desafiados subcutaneamente com 107 promastigotas de Leishmania L. infantum e a carga parasitária avaliada em fígado e baço, após 30 dias. A imunização com a construção CL-14 A2 potencializou a resposta celular ao antígeno A2 e peptídeos derivados, associada à células CD4 e CD8, com elevada produção de IFN-, e foi capaz de induzir proteção parcial em camundongos BALB/c, contra a infecção por L. infantum. Esses achados foram estatisticamente significativos, quando comparados aos observados para os grupos controle ou que receberam rA2 associada aos tipos diferentes de adjuvantes. Os resultados desse estudo confirmam o antígeno A2 como candidato vacinal promissor e sugerem que a estratégia utilizada representa uma abordagem capaz de promover imunogenicidade e proteção contra leishmaniose visceral, constituindo-se em estratégia alternativa para o desenvolvimento de vacinas, podendo incluir pesquisas visando testar e associar outros antígenos e protocolos de vacinação.Leishmaniases comprise a group of infectious diseases caused by protozoan parasites that affect predominantly underdeveloped countries. Among the clinical forms of the disease, visceral leishmaniasis is, certainly, the most severe, being considered the second cause of death, amongst all tropical diseases. Given the severity and complexity of this neglected public health issue, it is necessary to invest in research for vaccines capable of protecting the population under risk. Live attenuated vaccines can simulate the natural course of infection more closely, presenting a rich repertoire of antigens to the hosts immune system, potentially leading to a more potent and durable immunity. In the present study, the Trypanosoma cruzi CL-14 non-virulent strain was transfected with the integrative pROCKNeo plasmid containing a 729bp synthetic A2 gene, which has been previously shown to be immunogenic and protective in different studies. BALB/c mice were immunized intraperitoneally with 107 recombinant parasites through a homologous prime-boost protocol. Sera and splenocytes of mice were collected and tested in ELISA and ELISPOT and checked for anti-A2 antibodies and IFN- production, respectively. The results were compared with the ones obtained for the recombinant protein (rA2) associated with either MPL-A or Alúmen + CpG adjuvants. Mice were then challenged subcutaneously with 107 Leishmania L. infantum promastigotes and the parasite burden of liver and spleen was checked after 30 days. The immunization with the CL-14 A2 construct not only elicited a strong cellular CD4 and CD8 immune response, with high levels of IFN-, but also induced partial protection in BALB/c mice against L. infantum challenge. The difference among these results was significantly statistical when compared to the ones obtained with rA2, despite the use of two distinct adjuvants. Altogether, these results support the A2 antigen as a promising vaccine candidate and suggest that the expression of this protein in the CL-14 non-virulent strain may improve immunogeniticy and protection against visceral leishmaniasis, being an alternative in the search for new vaccines, including the association and test of different antigens and vaccination protocols