Indução de apoptose em macrófagos de camundongos BALB/c pela infecção in vitro com leishmania (Leishmania) amazonensis

A apoptose tem sido associada com um papel fundamental no controle ou progressão de diversas doenças, incluindo doenças parasitárias. Assim, foi objetivo deste estudo investigar o tipo de morte celular em macrófagos de camundongos BALB/c infectados in vitro por L. amazonensis. Nossos resultados demonstraram que macrófagosinfectados apresentaram fragmentação de DNA em padrão escada, observada em géis de agarose, típica de morte celular programada. Esse resultado foi corroborado pelo método do TUNEL, que também demonstra a fragmentação de DNA, e mostrou que essa fragmentação parece se iniciar já em 3 horas após a infecção. Outra característica marcante da apoptose, a exposição de fosfatidilserina, também foi demonstrada em macrófagos de BALB/c infectados com L. amazonensis. Esta demonstrou ser dependente de tempo de infecção e número de parasitas utilizados. Por esse método, mostramos que uma grande percentagem de células entra em apoptose após a infecção. Além disto, nossos dados demonstraram a necessidade da integridade do parasita para a indução desta morte celular, uma vez que a incubação de macrófagos de BALB/c com extrato de membrana oucitosólico não levou à fragmentação típica em escada do DNA. Esta típica fragmentação do DNA também foi observada em macrófagos de camundongos C57BL/6 infectados com L. amazonensis, mas não em macrófagos de camundongos BALB/c infectados com L. major ou L. guyanensis, sugerindo que a indução de apoptose está associada com a espécie de Leishmania infectante. A apoptose, induzida por L. amazonensis, pode estar relacionada com mecanismos de evasão da espécie e envolvida na susceptibilidade do hospedeiro.Apoptosis has been associated with a fundamental role on the control or progression of several diseases, including parasitic. Thus, the aim of this work was to investigate the type of cell death of BALB/c mice macrophages infected in vitro with L. amazonensis. Our results demonstrate that infected macrophages present a DNA fragmentation in a ladder pattern, visualized in agarose gels, typical of programmed celldeath. This result was corroborated by the TUNEL method, which also demonstrates DNA fragmentation, and that this fragmentation seems to initiate as soon as 3 hours postinfection. Another landmark of apoptosis, the exposure of phosphatidylserine, was also demonstrated in BALB/c macrophages infected with L. amazonensis. This exposure showed to be dependent of time of infection and the number of parasites used. By thismethod we demonstrate a great percentage of cells entering apoptosis after infection. Furthermore, our data show the necessity of parasite integrity for inducing the programmed cell death, once the incubation of BALB/c macrophages with membrane or cytosol extracts did not lead to the typical DNA fragmentation in the ladder pattern. This typical DNAfragmentation was also observed in C57BL/6 mice macrophages infected with L. amazonensis, although not in BALB/c macrophages infected with L. major, nor L. guyanensis, suggesting that apoptosis induction is associated with the infecting Leishmania species. Apoptosis, induced by L. amazonensis, may be related with the species evasionmechanisms, as well as be involved in host susceptibility