Estudo Funcional de Células T CD4+ expressando distintas regiões V beta do receptor de célula T (TCR) em pacientes com Leishmaniose cutânea

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-11T18:21:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tatjana_resumo.pdf: 20962 bytes, checksum: 60802cabb0ddf01c1079e82c7e3845f1 (MD5) Previous issue date: 9A leishmaniose é uma doença parasitária que afeta 12 milhões de pessoas em todo o mundo. O estabelecimento de uma resposta imune efetora contra a Leishmania é crítico para o controle da doença. Uma abordagem importante no estudo da resposta imune é avaliar a interação parasito-hospedeiro. Diferenças na resposta imune produzidas pela infecção com o parasita podem estar diretamente relacionadas com a existência do padrão de expressão dos receptores antigênicos presentes nos linfócitos T antígeno-específicos e nas diferentes subpopulações de clones de células T efetoras. Desta maneira, nosso trabalho envolveu um estudo com indivíduos não infectados e com pacientes apresentando a forma clínica cutânea da leishmaniose (LC). Objetivando entender melhor o papel que podem ter as subpopulações de células T CD4+, definindo o estado de ativação e o perfil de citocinas das células T CD4+ com expressão preferencial para as regiões variáveis da cadeia beta (V) do receptor de células T (TCR), na resposta imune humana contra Leishmania braziliensis. Utilizando a técnica de citometria de fluxo, avaliamos in vitro a frequência de células T CD4+, estimuladas ou não com o antígeno solúvel de Leishmania (SLA), expressando os seguintes V: V 2, 3, 5.1, 5.2, 8, 11, 12, 17 e 24, nos diferentes grupos. Nos pacientes com LC, avaliamos o estado funcional e a ativação celular pela expressão HLA-DR e de CD45RO, além citocinas pró-inflamatórias IFN-g, TNF-a e anti-inflamatória IL-10, nas células T CD4+ com expressão preferencial para as regiões Vb do TCR. Nossos resultados indicam que: (1) Pacientes com LC possuem frequência mais elevada de células T CD4+ com expressão preferencial para as regiões V5.2 e V24 do TCR, quando comparados a indivíduos não infectados; (2) O estímulo com SLA leva à expansão de células T CD4+ com expressão preferencial das regiões V 5.2, 11, 12 e 17 nos pacientes com LC; (3) O estímulo com SLA induz aumento de expressão tanto das moléculas de ativação HLA-DR e memória CD45RO, quanto de citocinas pró-inflamatórias IFN-g, TNF-a e anti-inflamatória IL-10, por células T CD4+ expressando diferentes regiões Vb em pacientes com LC; (4) Correlações positivas entre células T CD4+ com expressão preferencial das regiões Vb 5.2, 11 e 17 do TCR, expressando citocinas pró-inflamatórias IFN-g, TNF-a e anti-inflamatórias IL-10, respectivamente, foram vistas após o estímulo com SLA, nos pacientes com LC. Visto que a leishmaniose cutânea é uma doença que, na maioria dos casos desenvolve a forma branda, seguida de cura espontânea com proteção imunológica, a ativação de subpopulações específicas pode permitir a formação de uma resposta celular efetora. Este estudo pode ajudar na descoberta de antígenos imunodominantes de Leishmania, importantes por desencadear uma resposta eficiente no hospedeiro contra o parasita.Leishmaniasis is an endemic parasitic disease affecting 12 million worldwide. The establishment of an effective immune response directed against Leishmania is critical for the disease control. An important approach in the study of the immune response is evaluating host-parasite interaction. Different immune responses elicited by parasite infection can be directly related to distinct effector T cell subpopulations expressing specific TCR. To better understand the role that subpopulations of CD4+ T cells expressing distinct Vb usage may have in the human immune response against Leishmania braziliensis, a detailed study defining the activation state and the cytokine profile was performed with a group of well-defined cutaneous leishmaniasis patients and a group of normal individuals. Using flow cytometry, we evaluated in vitro the frequency of T CD4+ cells expressing the following V: V 2, 3, 5.1, 5.2, 8, 11, 12, 17 and 24 in the different groups. The frequency of Vb positive, CD4+ within CD4+ T cells was calculated without stimulus, as well as after culture with soluble Leishmania antigen (SLA). Our results show that: (1) CD4+ T cells expressing distinct Vb usage, increased expression of Vb 5.2 and V 24 in cutaneous leishmaniasis as compared with normal individuals; (2) cutaneous leishmanisis patients demonstrate and increase in CD4+ T cells expressing Vb 5.2, 11, 12 and 17, after stimulus with SLA; (3) Distinct populations of Vb expressing CD4+ T cells are found to expressing activation markers (HLA-DR), memory markers (CD45RO), as well as pro-inflammatory (IFN-g, TNF-a), and anti-inflammatory (IL-10), cytokines after stimulus with SLA; (4) Positive correlations between CD4+ T cells expressing Vb 5.2, 11 and 17, producing pro-inflammatory (IFN-g, TNF-a), and anti-inflammatory (IL-10), cytokines are seen after stimulus with SLA. Given that cutaneous leishmaniasis is a form of leishmaniasis that is often followed by spontaneous cure, the activation of specific subpopulations during this disease could allow the formation of an effective cellular response. This study might lead us to the discovery of immunodominant Leishmania antigens important for triggering efficient host responses against the parasite