Associação entre apresentação de antígeno, imunorregulação e morbidade na doença de Chagas

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-11T17:42:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 andreia__maria_molica.pdf: 886005 bytes, checksum: ce63d9d557751bcd1aa9558d42cd39db (MD5) Previous issue date: 12Trabalhos anteriores mostraram que células da imunidade inata produzem prostaglandinas que atuam como moléculas reguladoras da resposta imune a vários agentes etiológicos, incluindo o Trypanosoma cruzi, causador da doença de Chagas. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o papel de monócitos/macrófagos como célula reguladora, através da produção de PGE2 e de citocinas, bem como o de célula apresentadora de antígeno em indivíduos não infectados (NI) e portadores da doença de Chagas, com as formas clínicas indeterminada ou cardíaca. Células mononucleares totais (PBMC) e não aderentes (NA) do sangue periférico foram isoladas. Parte destas células foi submetida ao ensaio de proliferação celular, durante seis dias, na presença e ausência de antígenos do T. cruzi, a outra parte foi cultivada durante dezoito horas, após este período coletou-seo sobrenadante para dosagem de PGE2 e de IL-2, IL-4, IL-10 e IFN-g . As células foram utilizadas para análise fenotípica dos marcadores CD14, CD19, HLADR, CD80 e CD86. A resposta proliferativa a antígenos do T cruzi mostrou-se aumentada nos indivíduos dos grupos IND e CARD quando comparados ao grupo NI. Porém após remoção das células aderentes houve aumento da resposta proliferativa nos indivíduos NI. A adição de bloqueador (indometacina) de PGE2 as culturas de PBMC evidencia a formação de dois subgrupos dentro do grupo IND: altos respondedores (AR) e baixos respondedores (BR), mostrando que o bloqueio de PGE2 pode influenciar a resposta proliferativa nos indivíduos do grupo IND. A dosagem de PGE2 apresentou níveis semelhantes entre os grupos IND e CARD quando comparados ao grupo NI sugerindo um papel de molécula reguladora de PGE2 na tentativa de retorno a homeostasia do sistema imune. Por outro lado a dosagem das citocinas IL- 2, IL-4, IL-10 e IFN-g, mostraram níveis aumentados em quase todas as culturas estimuladas quando comparada as culturas sem estímulo. O estudo do fenótipo de células mononucleares totais e células não aderentes mostraram que células CD14+ expressam moléculas HLA-DR, CD80 e CD86 com intensidade semelhante nas culturas estimuladas ou não com T. cruzi, porém,apesar de não haver significância, é possível observar no grupo IND uma expressão menor de moléculas HLA-DR e CD 80. Já as células CD19+ expressam moléculas HLA-DR e CD80 com intensidade significativamente maior nas culturas NA estimuladas quando comparadas às culturas sem estímulo. Demonstrando quelinfócitos B em culturas empobrecidas de macrófagos intensificam sua função de APC. Os dados em conjunto sugerem que linfócitos B têm sua função de APC regulada por macrófagos frente estimulação antigênica pelo T. cruzi independente da resposta secundária, uma vez que células de indivíduos NI apresentam o mesmo perfil fenotípico dos pacientes estudados.It has been demonstrated that cells from innate immune response secreted prostaglandins that act as regulators of the immune response against some infectious agents as the pathogen of Chagas disease, the Trypanosoma cruzi. In this work we evaluated the onocytes/macrophages activity as regulatory cells, by the production of PGE2 and cytokines, and as antigen presenting cells (APC) in non infected individuals (NI) and patients with the indeterminate(IND) or cardiac (CARD) clinical forms of Chagas disease. We isolated peripheral blood mononuclear cells (total and not adherent) and performed cellular proliferative assays in the presence or not of T. cruzi antigens. After eighteen hours of culture, the supernatants were assayed for the presence of PGE2, IL-2, IL-4, IL-10 and IFN-g. Expression of CD14, CD19, HLA-DR, CD80 and CD86 markers were performed in the culture cells. Our data showed a high proliferative response of IND and CARD patients when compared to the NI group, in the presence of antigen. After removal of the adherentcells we observed an increase in the proliferative response of cells from the NI group. In the presence of Indomethacin, a PGE2 blocker, we observed that the proliferative response of cells from IND patients could be subdivided into high (AR) and down (BR) responders. These results demonstrate that the PGE2 inhibition influences the cellularproliferate response of IND patients. It interesting to note, that IND and CARDpatients presented similar levels of PGE2 in comparison to NI group. These data evidence that PGE2 has an important role as an immune regulatory molecule. Our results also showed higher levels of IL-2, IL-4, IL-10 e IFN-g cytokines in antigen stimulated cultures when comparied to non the stimulated. Phenotypical analyses of PBMC and NA populations demonstrated that CD14+ cells have similar expression of HLA-DR, CD80 and CD86 in cultures stimulated or not with T. cruzi antigen. IND patients cells presented lower HLA-DR and CD80 expression although not significant. Analyses of CD19+ cells in NA stimulated cultures showed higher expression of HLA-DR and CD80 molecules when compared with non stimulated cultures. These results demonstrated that in the absence of macrophages, B-lymphocytes may function as antigen presenting cells. These data suggest that in presence of T. cruzi, APC function of B-lymphocytes is regulated by macrophages, independent of the secondary response, since NI cells presented the same phenotypical profile by the patients with Chagas disease