Taxonomia, diversidade e bioprospecção de fungos endofíticos associados à planta medicinal Lafoensia pacari A. St. Hil. (mangava-brava) presente no Pantanal Mato-grossense

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-11T16:06:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_soraya_sander_amorim.pdf: 2841113 bytes, checksum: adc5eb98dbdb973c3e333afb02eac0be (MD5) Previous issue date: 20Fungos endofíticos são aqueles que colonizam o interior de tecidos vegetais por pelo menos uma fase de seu ciclo de vida sem causar sintomas aparentes de doença. Estes fungos exercem importantes papéis ecológicos e fisiológicos na interação com suas plantas hospedeiras e são potenciais fontes de metabólitos secundários bioativos de interesse farmacológico e agrícola. Dentre os critérios existentes para a seleção da espécie hospedeira alvo para isolamento de seus fungos endofíticos destacam-se as plantas medicinais, bem como aquelas que ocorrem em regiões de grande biodiversidade. Lafoensia pacari, planta medicinal encontrada no Pantanal Mato-grossense, é utilizada principalmente para o tratamento de distúrbios gástricos por meio do macerado das folhas e da casca. Considerando o exposto, este trabalho objetiva-se por caracterizar a comunidade de fungos endofíticos associados à L. pacari, bem como avaliá-la como fonte de metabólitos antiparasitários, antivirais e herbicida. A partir de fragmentos de folhas, cascas e sementes de L. pacari foram isolados 236 fungos filamentosos e três leveduras. A identificação dos fungos filamentosos foi realizada por meio do sequenciamento da região transcrita interna ITS-5.8S da região do gene do rRNA, bem como pelo sequenciamento parcial do gene da â-tubulina. As leveduras foram submetidas ao sequenciamento dos domínios D1/D2 da subunidade maior do DNA ribossomal. Sessenta táxons de fungos filamentosos e três de leveduras foram identificados e pertencentes as classes Dothideomycetes, Sordariomycetes, Eurotiomycetes e Saccharomycetes (Ascomycota), Ustilaginomycetes (Basidiomycota) e Zygomycetes (Zygomycota). Os gêneros identificados com maior frequência foram Phyllosticta, Diaporthe, Lasiodiplodia, Colletotrichum, Pseudofusicoccum, Aspergillus e Penicillium. As sementes de L. pacari foram também germinadas em meios Murashige & Skoog (MS) e Wood plant (WP) para o isolamento de seus fungos endofíticos verdadeiros a partir das plântulas, das quais foram obtidos nove isolados pertencentes aos táxons Cladosporium sp. 1, Cladosporium sp. 2, Aspergillus sp. e Eremothecium gossypii. A diversidade da comunidade de fungos endofíticos associados a L. pacari apresentou-se alta, com grande riqueza de espécies edominância de alguns táxons, enquanto que para as plântulas estes índices foram menores. Extratos brutos diclorometânicos foram produzidos a partir de todos os isolados fúngicos obtidos das plantas no ambiente natural, e a partir das folhas e cascas de L. pacari. Já os isolados obtidos a partir das plântulas cultivadas in vitro foram submetidos à extração em acetato de etila. Todos os extratos obtidos foram submetidos a ensaios biológicos a fim de avaliar as atividades antiparasitárias, antivirais e herbicida. Nenhum extrato apresentou atividade frente Leishmania amazonensis e o vírus da dengue. Quatro extratos pertencentes aos táxons Aspergillus aculeatus, Coniothyrium sp. e Valsariaceae sp. foram ativos frente Trypanosoma cruzi, os quais apresentaram alta eficiência e baixa citotoxicidade, sendo considerados promissores para o isolamento de substâncias tripanocidas. Os extratos também foram avaliados quanto à atividade herbicida frente a sementes de Latuca sativa (alface) e Allium schoenoprasum (cebolinha verde). Dos extratos avaliados, 49 apresentaram atividade herbicida, sendo que 14 inibiram 100% a germinação dos dois modelos estudados. Dentre os fungos bioativos, três endofíticos verdadeiros apresentaram atividade herbicida para alface. A partir dos resultados obtidos verifica-se que a planta medicinal L. pacari representa um promissor reservatório de diversificados fungos endofíticos capazes de produzir metabólitos bioativos que podem ser utilizados tanto para fins terapêuticos quanto para a agricultura.Endophytes are microorganisms that inhabit plant tissues during at least one stage of their life cycle and they do not cause any apparent symptom of disease on their hosts. They play important ecological and physiological roles in the interaction with their host plants and are a potential source of bioactive secondary metabolites of pharmacological and agricultural interest. The criteria for the selection of the target host species is a choice of medicinal plants and those that occur in regions of great biodiversity. Lafoensia pacari, a medicinal plant found in the little studied Pantanal Mato-Grossense, used for the treatment of gastric disorders by macerating the leaves and the bark. Considering the above, this work aims to characterize the community of endophytic fungi associated with L. pacari, as well as evaluating it as a source of antiparasitic, antiviral and herbicidal metabolites. From the fragments of leaves, bark and seeds of L. pacari, 236 filamentous fungi and 3 yeasts were isolated. They were identified by sequencing the internal transcribed region ITS-5.8S of the rRNA gene region, as well as by the partial sequencing of the â-tubulin gene. Yeasts were subjected to sequencing of the D1/D2 domains of the major subunit of ribosomal DNA. A total of 60 filamentous fungal taxa and tree yeast taxa were obtained, represented by the classes Dothideomycetes, Sordariomycetes, Eurotiomycetes, and Saccharomycetes (Ascomycota); Ustilaginomycetes (Basidiomycota); and Zygomycetes (Zygomycota). The most abundant genera were Phyllosticta, Diaporthe, Lasiodiplodia, Colletotrichum, Pseudofusicocum, Aspergillus and Penicillium. Lafoensia pacari seeds were germinated in the Murashige & Skoog (MS) and Wood plant (WP) media for the isolation of their true endophytes from the seedlings and nine isolates were obtained in the taxa Cladosporium sp. 1, Cladosporium sp. 2, Aspergillus sp. and Eremothecium gossypii. The diversity of the endophytic fungi community associated with L. pacari was high, with higher taxonomic richness values and lowest taxonomic dominance. For the seedlings, these indexes were lower, indicating lower diversity and higher dominance. The production of bioactive secondary metabolites was evaluated. Dichloromethane crude extracts were produced from all fungal isolates obtained from the leaves and barks of L. pacari. The isolates obtained from the seedlings cultured in vitro were extracted with ethyl acetate. All extracts were submitted to biological assays to evaluate antiparasitic, antiviral and herbicidal activities. No extract showed activity against Leishmania amazonensis and the dengue virus. Four extracts belonging to taxa Aspergillus aculeatus, Coniothyrium sp. and Valsariaceae sp. were active against Trypanosoma cruzi, which present high efficiency and low cytotoxicity, because this the extracts were considered promising for the isolation of trypanocidal compounds. The extracts were also evaluated for herbicidal activity against the seeds of Latuca sativa (lettuce) and Allium schoenoprasum (chives). Forty nine extracts showed herbicidal activity, and 14 inhibited 100% of the germination of the both models used at the assay. Among the bioactive fungi, three true endophytes showed herbicide activity for lettuce. From the results obtained it is verified that the medicinal plant L. pacari represents a promising reservoir of diversified endophytic fungi capable of producing bioactive metabolites that can be used for both therapeutic and agricultural purposes