Isolamento, tipificação e genotipagem de Brucella abortus isoladas de bovinos no Brasil

Os objetivos deste estudo foram (i) avaliar a técnica de isolamento de Brucella spp. e (ii) biotipar e genotipar amostras de B. abortus isoladas de bovinos no Brasil, a fim de subsidiar o Programa Nacional de Controle e Erradicação de Brucelose e Tuberculose (PCNEBT). O enriquecimento em caldo triptose suplementado com antimicrobiano de Farrell no isolamento de Brucella spp. de material clínico de frigoríficos proporcionou um aumento de 51,36% na taxa de identificação de amostras infectadas em relação ao plaqueamento direto (74/187 versus 36/187), atingindo o maior número de isolados após sete dias de incubação. Dentre 137 isolados de B. abortus de bovinos no Brasil entre 1977 a 2008 foram confirmados a presença das biovariedades 1, 2 e 3 e identificadas pela primeira vez as biovariedade 4 e 6. PCR AMOS-ERY classificou as amostras da biovariedade 3 como pertencentes ao subgrupo 3b. Três amostras da biovariedade 3 isoladas no Estado do Pará foram positivas ao PCR-AMOS, podendo indicar um marcador epidemiológico. O Painel 1 do MLVA16 revelou dois conglomerados (I e II): um agrupando principalmente o genótipo 40 e o outro o genótipo 28. Painel 2A e 2B do MLVA16 apresentaram alto grau de diversidade nas 137 amostras estudadas, identificando 89 genótipos. A MLVA16 propiciou o conhecimento da distribuição de genótipos e permitirá a construção de um banco de dados para o paísThe aims of the present study were (i) to evaluate isolation methods for Brucella spp. and (ii) to biotype and genotype B. abortus isolates from cattle in Brazil, in order to support the Programa Nacional de Controle e Erradicação de Brucelose e Tuberculose (National Program on the Control and Erradication of Brucellosis and Tuberculosis) (PCNEBT). Enrichment using tryptose broth supplemented with Farrel antimicrobials increased the isolation rate of Brucella spp. 51.36% in clinical material from slaughterhouses (74/187) versus direct plating (36/187). Most of isolates were obtained after 7-day enrichment. From 137 Brazilian B. abortus isolates (from 1977 to 2008) biovars 1, 2, and 3 were confirmed and biovars 4 and 6 were identified for the first time. All biovar 3 isolates were classified as subgroup 3b by AMOS-ERY PCR. Three biovar 3 isolates from State of Pará amplified in AMOS PCR and could become an epidemiological marker. MLVA16 panel 1 identified two cluster (I and II): one that mainly clusters around genotype 40 strains and another that clusters around genotype 28. MLVA16 panels 2A and 2B showed high diversity among the 137 studied strains, identifying 89 genotypes. MLVA16 helped knowing the distribution of genotypes and will help to build a Brazilian B. abortus genotype databas