Avaliação da toxicidade in vitro e in vivo de moléculas potencialmente terapêuticas

No desenvolvimento de novos medicamentos, nove entre dez candidatos promissores que iniciam a fase clínica não receberão aprovação. Reduzir a falha de candidatos a fármacos utilizando ensaios in vitro pode reduzir o uso desnecessário de animais, bem como prever efeitos tóxicos em fases pré-clínicas. O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade pelo método MTT de quatro novas substâncias nas linhagens celulares A549, H9C2, HEP-G2, LLC-PK1 e NEURO-2. Para substância que apresentou menor citotoxicidade no teste de MTT, realizou-se o teste do vermelho neutro de acordo com a OECD 129 a fim de extrapolar o resultado obtido como dose inicial para o teste de toxicidade aguda (OECD 423). A dose inicial de 300 mg/kg não promoveu efeitos tóxicos observáveis para os animais estudados. Por outro lado, a dose de 2000 mg/kg causou a morte de um animal em cada grupo, entretanto, nenhum dos grupos apresentou alterações macroscópicas na necropsia. Os resultados do presente estudo mostram limitações do teste de vermelho neutro como preditor da dose inicial para o estudo de toxicidade aguda devido a vários fatores como limitada biodisponibilidade in vivo e geração de metabólitos tóxicos.In the development of new medicines, nine out of ten promising candidates entering the clinical phase will not receive approval. Reducing the failure of drug candidates using in vitro assays can reduce the unnecessary use of animals as well as predict toxic effects at preclinical stages. The objective of the present study was to evaluate MTT cytotoxicity of four new substances in the A549, H9C2, HEP-G2, LLC-PK1 and NEURO-2 cell lines. For the substance that showed the lowest cytotoxicity in the MTT test, the neutral red test according to OECD 129 was performed in order to extrapolate the result obtained as the initial dose for the acute toxicity test (OECD 423). An initial dose of 300 mg / kg did not promote observable toxic effects for the animals studied. On the other hand, the dose of 2000 mg / kg resulted in the death of one animal in each group; however, none of the groups presented macroscopic changes at necropsy. The results of the present study shows limitations of the neutral red test as a predictor of the initial dose for the acute toxicity study due to several factors such as limited in vivo bioavailability and generation of toxic metabolites