Agonistas -adrenérgicos modulam canais iônicos nociceptivos em neurônios dos gânglios da raiz dorsal

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-11T03:13:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_naiara.pdf: 1416680 bytes, checksum: c5d998bb253f2fb171f9a77d2f94e3ec (MD5) Previous issue date: 3A noradrenalina e a adrenalina circulante, através da ativação dos receptores - e -adrenérgicos, estão envolvidas no controle intrínseco da dor. No sistema nervoso periférico, a estimulação simpática pode excitar os neurônios sensoriais em animais com tecidos inflamados ou após a lesão do nervo periférico. Além disso, modelos de dor neuropática geralmente estão associados a um aumento do tônus simpático das fibras que inervam os Gânglios da Raiz Dorsal (DRG), o que sugere a existência de interações entre a atividade do Sistema Nervoso Simpático (SNS) e neurônios aferentes primários sob condição dolorosa. Alterações na sensibilidade a estímulos nociceptivos podem ser causadas por mudanças nas propriedades dos canais iônicos dos neurônios sensitivos aferentes primários. Por exemplo, a noradrenalina aumenta a frequência de disparos em neurônios nociceptores via ativação de adrenoceptores -1 (Zhang et al., 2011). No entanto, sabe-se pouco dos efeitos da ativação de receptores -adrenérgicos sobre as moléculas que iniciam a transdução do estímulo em nociceptores primários. Para verificar isso, testamos se a ativação de receptores adrenérgicos modula os canais iônicos ativados por ligantes expressos em neurônios sensitivos. Além disso, procuramos alterações em parâmetros dos Potencias de Ação (PA) que podem determinar a sensibilidade dos neurônios a estímulos nocivos. Desse modo, o objetivo deste estudo é identificar a existência de interações entre agonistas -adrenérgicos e canais iônicos capazes de transformar estímulos nocivos em sinais elétricos propagáveis nos neurônios DRG, como os receptores TRPV1 (Receptor Vanilóide de Potencial Transitório tipo 1), os P2X (Canais Purinérgicos Ativados por ATP) e os ASICs (Canais Iônicos Sensíveis a Ácido). Neste trabalho, utilizamos neurônios dissociados dos DRG de ratos Wistar machos com peso de 220-280g. As células dissociadas foram tratadas com agonistas adrenérgicos, fenilefrina (1; 1M) ou clonidina (2; 10M), e os respectivos grupos controles receberam o veículo de diluição dos agonistas. Os registros eletrofisiológicos foram realizados entre 24-96 horas após a cultura. 3 Os registros eletrofisiológicos foram realizados utilizando a técnica de patch clamp na modalidade whole-cell: voltage clamp para registro de correntes iônicas e current clamp para o registro de potenciais de ação e dos limiares de excitabilidade dos neurônios. Para provocar as diferentes correntes iônicas, foram feitas aplicações rápidas (2 segundos) de capsaicina (3M), ATP (50M), pH=7 ou pH=6. Essas soluções ativam correntes iônicas via receptores TRPV1, P2X e ASICs, respectivamente. A fenilefrina aumentou a densidade de corrente P2Xnão3 de -21 ± 6 pA/pF, (média ± EPM, n=22) no controle para -51 ± 11 pA/pF, n=24 (p<0,05). Além disso, a fenilefrina aumentou em 95% (p < 0,05) o limiar de excitabilidade dos neurônios com correntes ASIC acionadas por solução de pH6. A clonidina reduziu a corrente disparada por capsaicina de -218 ± 24 pA/pF (n=53) para -146 ± 26 pA/pF, n=44 (p < 0,05). Nenhum efeito significativo da fenilefrina ou da clonidina foi observado em correntes ativadas por ácido (pH=7.0 ou pH=6.0), nem na proporção de células responsivas aos diferentes estímulos (ATP, capsaicina e baixo pH) e nem na proporção de células com características tônicas versus fásicas. Nossos resultados sugerem que a ativação dos -adrenoceptores modula duas importantes moléculas transdutoras nociceptivas. Esse efeito é evidenciado pelo aumento da densidade de corrente P2Xnão3, na presença de fenilefrina (agonista adrenérgico -1) e pela redução da densidade de corrente mediada pelos receptores TRPV1, na presença de clonidina (agonista -2 adrenérgico).Noradrenalin and the circulating adrenaline, through the activation of -and -adrenergic receptors are involved in the intrinsic control of pain. In the peripheral nervous system, sympathetic stimulation can excite sensory neurons in animals with inflamed tissues or after peripheral nerve injury. Furthermore, models of neuropathic pain are usually associated with an increased sympathetic tone of the fibers innervating the Dorsal Root Ganglia of (DRG), which suggests the existence of interactions between the activity of the sympathetic nervous system (SNS) and primary afferent neurons under painful condition. Changes in sensitivity to noxious stimuli may be caused by changes in the properties of ionic channels of primary afferent sensory neurons. For example, noradrenaline increases the firing rate of nociceptors neurons via activation of 1-adrenoceptors (Zhang et al., 2011). However, known about the effects of activation of -adrenergic receptors on molecules that initiate the transduction of the stimulus in primary nociceptors. To verify that, we tested whether activation of adrenergic receptors modulates ion channels activated by ligands expressed in sensory neurons. In addition, we seek changes in parameters of Action Potential (PA) that can determine the sensitivity of neurons to noxious stimuli. Thus, the aim of this study is to identify the existence of interactions between -adrenergic agonists and ion channels that transform noxious stimuli into electrical signals to be propagated in DRG neurons, channels such as TRPV1 receptors (Transient Receptor Potential Vanilloid type 1), P2X (Purinergic channels, activated by ATP) and ASICs (Acid-Sensing Ion Channels). In this work, we used the DRG neurons dissociated from male Wistar rats weighing 220-280g. The dissociated cells were treated with adrenergic agonists, phenylephrine (1; 1M) or clonidine (2; 10M), and the respective control groups received the vehicle dilution of agonists. Electrophysiological recordings were performed between 24-96 hours after culture. Electrophysiological recordings were performed using the patch clamp technique in whole-cell mode: voltage clamp to record ionic currents and current clamp to record action potentials and excitability thresholds of neurons. To elicit the ionic currents, fast application (2 seconds) of capsaicin (3M), ATP (50M), 5 pH = 7 and pH 6 were made. These solutions activate ionic currents via TRPV1, ASICs and P2X receptors, respectively. Phenylephrine increased P2Xnão3 current density from -21 ± 6 pA/pF (mean ± SEM, n=22) in control to -51 ± 11 pA/pF, n=24 (p < 0.05). Furthermore, phenylephrine increased by 95% (p < 0.05) neuronal excitability threshold of neurons with ASIC currents triggered by pH6s solution. Clonidine reduced capsaicin-evoked current from -218 ± 224 pA/pF (n=53) to -146 ± 26 pA/pF, n=44 (p < 0.05). No significant effect of clonidine and phenylephrine were observed in acid activated currents (pH = 7.0 or pH = 6.0) or the proportion of cells responsive to different stimuli (ATP, capsaicin and low pH), or the proportion of cells with characteristics tonic versus phasic. Our results suggest that activation of -adrenoceptors modulates two important transducing nociceptive molecules. This effect was evidenced by the increased P2Xnão3 current density in the presence of phenylephrine (-1 adrenergic agonist) and the reduction of the current density mediated by TRPV1 receptors in the presence of clonidine (-2 adrenergic agonist)