Emprego do peptídeo 99mTc-HYNIC-ßAla-Bombesina(7-14) na identificação de tumor de próstata da linhagem LNCaP em modelo experimental

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-10T04:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o___leonardo_lima_fuscaldi.pdf: 2262426 bytes, checksum: 547e8f235d108cfa32aa45261c5db635 (MD5) Previous issue date: 27O câncer de próstata é um dos tumores de maior incidência entre os homens, apresentando elevados índices de mortalidade. Os atuais métodos de diagnóstico não são capazes de identificá-lo nos estágios iniciais, resultando muitas vezes em diagnóstico tardio com metástase. Assim, existe por parte da comunidade científica uma busca incessante por métodos de diagnóstico capazes de detectar com precocidade o tumor, facilitando o tratamento e aumentando as chances de cura. Nesse sentido, a medicina nuclear propicia métodos capazes de detectar tumores em estágios iniciais, pois se baseia em alterações bioquímicas e fisiológicas do tecido, como a super-expressão de receptores para o peptídeo liberador de gastrina (GRPr`s) pelas células de tumor de próstata. A bombesina, um tetradecapeptídeo isolado do sapo Bombina bombina, apresenta alta afinidade por esse receptor, pois é análoga ao peptídeo liberador de gastrina. Portanto, este trabalho tem como objetivo preparar o complexo 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesina(7-14) e usá-lo na identificação de tumor de próstata, linhagem LNCaP, em modelo experimental. Nos ensaios in vitro, alíquotas de 0,026 MBq do radiopeptídeo foram incubadas com 2x106 células LNCaP em banho-maria à 37ºC, por 1 e 4 horas, com e sem adição prévia do peptídeo frio (n=3). O tumor de próstata foi induzido no flanco superior direito de camundongos, machos BALB/c nude, por meio da injeção subcutânea de 5x106 células LNCaP ressuspendidas em 150 µL de Matrigel:meio RPMI-1640 (1:1). O perfil de biodistribuição (n=5) e as imagens cintilográficas (n=3) foram obtidos 1 e 4 horas após a administração intravenosa de 7,4 MBq do 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesina(7-14). Para tanto, foram utilizados camundongos machos BALB/c sadios e animais com tumor de próstata com 15, 20 e 25 dias de desenvolvimento. Os resultados do estudo in vitro mostraram que a fração do radiopeptídeo que se ligou às células foi de 2,08±0,30% (1 hora) e 2,44±0,18% (4 horas). Dos percentuais que se ligaram, as frações que se internalizaram foram de 25,64±3,14% (1 hora) e 25,27±2,05% (4 horas). Por outro lado, a incubação prévia das células com o peptídeo frio reduziu a ligação em 32,21% (1 hora) e 43,85% (4 horas). A internalização foi reduzida em 57,88% (1 hora) e 53,70% (4 horas). O perfil de biodistribuição do 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesina(7-14) nos camundongos sadios e com tumor de próstata mostrou uma rápida depuração sanguínea, com elevada captação pelos rins. O percentual da dose injetada (%DI) do radiotraçador captado pelo tumor foi estatisticamente maior quando este apresentava 25 dias de desenvolvimento, aproximadamente 1% (1 hora) e 0,1% (4 horas). As imagens cintilográficas corroboraram com o perfil de biodistribuição do radiofármaco, observando-se intensa captação do 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesina(7-14) pelos rins e pela bexiga, em todos os grupos investigados. Por outro lado, o foco tumoral foi melhor visualizado nos camundongos com tumor de próstata com 25 dias de desenvolvimento, apresentando tamanho em torno de 7,6 mm. Os resultados obtidos dos ensaios in vitro mostraram que o radiopeptídeo ligou-se especificamente aos GRPr`s presentes nas células LNCaP. Os dados dos estudos de biodistribuição e de imagens cintilográficas sugerem que o 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesina(7-14) pode ser usado para a identificação de tumor de próstata, linhagem LNCaP, por meio de imagens cintilográficas, em modelo experimental.Prostate cancer is one of the most prevalent tumors in men, showing high mortality rates. Current diagnostic methods are not able to identify early prostate carcinoma, often resulting in a late diagnosis with established metastasis. Thus, there is by the scientific community an incessant search for diagnostic methods for early assessment of prostate cancer, facilitating the treatment and increasing the chances of cure. In this context, nuclear medicine provides a diagnostic method which can detect tumors at an early stage, because it is based on biochemical and physiological changes of the tissue, such as overexpression of gastrin releasing peptide receptors (GRPr`s) by prostate cancer cells. Bombesin, a tetradecapeptide isolated from the frog Bombina bombina, has a high affinity for the GRPr`s, since it is analogous to gastrin releasing peptide. Therefore, this study aims to prepare the complex 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesin(7-14) and use it for the identification of prostate tumor, LNCaP line, in an experimental model. For in vitro assays, aliquots of 0.026 MBq of the radiopeptide were incubated with 2x106 LNCaP cells in a water bath at 37°C, for 1 and 4 hours, with and without prior addition of cold peptide (n=3). Prostate tumors were induced into the upper right flank of male BALB/c nude mice by subcutaneous injection of 5x106 LNCaP cells resuspended in 150 µL of Matrigel:RPMI-1640 medium (1:1). Biodistribution profile (n=5) and scintigraphic images (n=3) were obtained at 1 and 4 hours after intravenous injection of 7.4 MBq of 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesin(7-14). To assess this, healthy male BALB/c mice and tumor-bearing male BALB/c nude mice with 15, 20 and 25 days of tumor development were used. In vitro study results showed that the fraction of the radiopeptide which bound to LNCaP cells was 2.08±0.30% (1 hour) and 2.44±0.18% (4 hours). From the percentage which was bound, the internalized fractions were 25.64±3.14% (1 hour) and 25.27±2.05% (4 hours). On the other hand, prior incubation of LNCaP cells with cold peptide reduced binding percentage in 32.21% (1 hour) and 43.85% (4 hours). Internalization percentage was reduced in 57.88% (1 hour) and 53.70% (4 hours). Biodistribution profile of 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesin(7-14) in healthy and tumor-bearing mice showed rapid blood clearance, with high uptake by the kidneys. Percentage of injected dose (%ID) of the radiotracer captured by the tumor focus was significantly higher after 25 days of tumor development, approximately 1% (1 hour) and 0.1% (4 hours). Scintigraphic images have confirmed the radiopharmaceutical biodistribution profile, showing intense uptake of 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesin(7-14) by kidneys and bladder, in all investigated groups. In contrast, the tumor focus was best viewed in tumor-bearing mice with 25 days of tumor development, with tumor size around 7.6 mm. In vitro assay results showed that the radiopeptide binds specifically to GRPr`s present in LNCaP cells surface. Biodistribution and scintigraphic images data suggest that 99mTc-HYNIC-Ala-Bombesin(7-14) is able to identify prostate tumor, LNCaP line, by scintigraphic images in experimental model