Antígenos contendo repetições de aminoácidos como fatores de virulência na infecção pelo Trypanosoma cruzi

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-10T04:11:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_bruna_m_valente.pdf: 2787412 bytes, checksum: 343ffdb586ff5657bf8a7a5e77ee1493 (MD5) Previous issue date: 1Clones de cDNA de uma biblioteca de formas amastigotas foram selecionados após incubação com soro de pacientes com doença de Chagas. Entre os clones reconhecidos pelos anticorpos presentes no soro desses pacientes foram identificadas sequências codificadoras de proteínas homólogas à proteína ribossômica eucariótica L7a. Diferentemente das proteínas L7a de outros eucariotos, a proteína L7a de T. cruzi contem um domínio com repetições dos aminoácidos AlaLys-Pro na sua porção N-terminal. Para avaliar o papel de repetições de aminoácidos presentes em antígenos de T. cruzi, foram geradas as versões recombinantes da proteína completa (TcL7a), bem como versões truncadas contendo apenas o domínio repetitivo (TcL7aRep) ou a região não repetitiva (TcL7aDeltaRep), as quais foram usadas para imunizar camundongos. Animais imunizados com a TcL7a completa produzem anticorpos IgG contra essa proteína, bem como contra o domínio repetitivo, mas produzem baixos níveis de anticorpos contra a região não repetitiva. Por outro lado, animais imunizados com a TcL7aRep não geram anticorpos contra nenhum destes antígenos. Em relação a resposta imune celular, animais imunizados com TcL7a produzem altos níveis de IFN- e IL10, enquanto que níveis muito baixos de IFN- foram detectados em animais imunizados com TcL7aRep e TcL7aDeltaRep. Após o desafio com tripomastigotas do clone Cl Brener, observou-se uma proteção parcial nos animais imunizados com a proteína completa, enquanto que a imunização com TcL7aDeltaRep não alterou os níveis de parasitemia em relação aos animais controles. Em contraste, a imunização com TcL7aRep resultou em uma exacerbação da parasitemia em comparação com os outros grupos. A imunização de animais com o domínio repetitivo, seguida da imunização com a proteína completa ocasiona uma diminuição da produção de IgG2a contra a TcL7a completa e contra a TcL7aRep mas não interfere na produção de IgG1, IFN- e IL-10. Nossos resultados sugerem portanto que os domínios repetitivos presentes em antígenos de T. cruzi podem regular negativamente a resposta Th1 capaz de conferir proteção contra o parasitoUsing an immunoscreening approach, several antigens derived from a Trypanosoma cruzi amastigote cDNA library that react with sera from chronic chagasic patients were isolated. One such antigen, homologous to the eukaryotic L7a ribosomal protein and containing an Ala-Lys-Pro rich repetitive domain at its N-terminus, was characterized. To evaluate the role of amino acid repeats present in T. cruzi antigens, we generated recombinant versions of the complete antigen (TcL7a) as well as truncated versions containing only its repetitive (TcL7aRep) or the nonrepetitive domain (TcL7aDeltaRep) and used them to immunize mice. Animals immunized with TcL7a produced IgG antibodies against the complete protein as well as against the repetitive domain. On the other hand, mice immunized with TcL7aRep and TcL7aDeltaRep did not generate antibodies against any of these antigens respectively. Regarding cellular immune responses, whereas mice immunized with TcL7a produced high levels of IFN- and IL-10, only very low levels of IFN- were detected in mice immunized with TcL7aRep and TcL7aDeltaRep. After challenging immunized mice with trypomatigotes, we observed a partial protection in mice immunized with the complete protein whereas immunization with TcL7aDeltaRep did not alter parasitemia levels compared to controls. In contrast, immunization with TcL7aRep resulted in an exacerbation of the parasitemia compared to the other groups. Immunization with the repetitive domain followed by immunization with full length L7a protein results in a decreased production of IgG2a against TcL7a and TcL7aRep but does not alter the production of IgG1, IFN- or IL-10. Our results suggest that repetitive domains present in T. cruzi antigens may be used by the parasite to downregulate the Th1 response against the infectio