Caracterização molecular de amostras de Toxoplasma gondii isoladas de animais natural e experimentalmente infectados e de amostras clínicas

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-10T03:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_mariana_maciel_cunha.pdf: 2538968 bytes, checksum: be130abebb35d85e576973f80330af13 (MD5) Previous issue date: 26A obtenção de isolados a partir de bioensaio em camundongos é a metodologia mais utilizada para a caracterização molecular de Toxoplasma gondii. A realização da genotipagem diretamente em amostras biológicas pode ser uma ferramenta útil e rápida, que permite a análise de um grande número de amostras. O objetivo deste trabalho foi realisar a genotipagem de T. gondii a partir de diferentes amostras biológicas utilizando a técnica de Multiplex multilocus nested PCR-RFLP (Mn-PCR-RFLP). Foram utilizados pulmão e cérebro de camundongos experimentalmente infectados com cinco isolados de T. gondii, 15 amostras de coração de galinhas caipiras naturalmente infectadas e 12 amostras de sangue humano de recém-nascidos com toxoplasmose congênita. Os genótipos obtidos foram identificados e comparados com os existentes no banco de dados ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Em camundongos experimentalmente infectados, a genotipagem completa foi obtida a partir de DNA extraído de pulmão após sete dias de infecção. Em cérebro, não houve amplificação na maioria das amostras. A diferença observada entre as amplificações nos dois órgãos pode refletir a cinética de dispersão e multiplicação do parasito, além da capacidade patogênica dos diferentes isolados. Em galinhas caipiras naturalmente infectadas, foi possível realizar a genotipagem completa em duas amostras e parcial em 13 amostras. Os dois novos genótipos obtidos ainda não haviam sido descritos na literatura. Em sangue obtido de recém-nascidos com toxoplasmose congênita, foi possível realizar a genotipagem parcial de oito das 12 amostras analisadas.The isolation of Toxoplasma gondii by mouse bioassay is the most used method for molecular characterization of this parasite. Genotyping directly in biological samples can be a useful and fast tool, which allows the analysis of a large number of samples. The aim of this study was genotyping T. gondii from different biological samples using multiplex multilocus nested PCR-RFLP (Mn PCR-RFLP). Lung and brain of mice experimentally infected were used with five isolates of T. gondii, 15 heart samples from naturally infected free-range chickens as well as 12 human blood samples of newborns with congenital toxoplasmosis were used. The genotypes obtained were identified and compared with ToxoDB database (http://toxodb.org/toxo/). In experimentally infected mice, the complete genotype was obtained from DNA extracted from lungs after seven days of infection. In the brain, there was no amplification in most samples. The difference between the amplifications in the two organs may reflect the kinetics of dispersion and multiplication of the parasite and the pathogenic ability of different isolates. In naturally infected free-range chickens, it was possible to perform complete genotyping in two samples and partial genotyping in 13 samples. The two new genotypes obtained were not yet described in the literature. In blood from infants with congenital toxoplasmosis it was possible to perform partial genotyping of eight of the 12 samples analyzed