Desenvolvimento e avaliação da atividade antifúngica de formulação microemulsionada para o tratamento de onicomicoses contendo óleos essenciais de Melissa officinalis L. E Cymbopogon citratus (DC.) Stapf

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Initially, the eight plants essential oils activity was tested: Aniba parviflora, Aniba rosaeodora, Aniba canelilla, Ocotea cymbarum, Melissa officinalis, Cymbopogon citratus, Piper nigrum and Cinnamomum camphora, against ATCC strains of T. rubrum and C. albicans. The adopted method was broth microdilution The most active oils against fungi were M. officinalis (m) and C. citratus (c), which had minimum inhibitory concentrations (MICs) between 400 and 800 μg.mL-1 and were therefore selected to be incorporated in the microemulsions (MEs). Before, the miscibility test was performed to verify if such essential oils would be miscible in the inputs chosen to compose the systems. Then, microemulsion bases were prepared with different combinations of surfactants (Tween® 20, Tween® 80 and Kolliphor® EL), cosurfactants (Trascutol® P and ethyl and isopropyl alcohols), oil phase (oleic acid) and water, whose proportions were determined by the construction of pseudoternary-ternary phase diagrams, which also enabled the choice of the best MEs regions. The oils (m and c) were then incorporated as oily phases in the base formulations, resulting in a total of twenty MEs which were rescreened in antifungal assay in order to verify and compare the activity of the bases MEs with the MEs containing the essential oils against the studied pathogens. Thus, the five MEs with the highest antifungal action – all containing the oil m (Bm, Em, Gm, Hm, and Im) – were selected and physico-chemical and cytotoxicity tests were performed. The Gm and Hm formulations were considered the best, because in the physicochemical characterization, their viscosity values indicated good fluidity (Gm: 10,43 cP and Hm: 9,0 cP); transparency, since they presented refractive indexes (Gm: 1,380 and Hm: 1,379) and transmittance (Gm: 99.50% and Hm: 99.23%), close to that of water; the electrical conductivity values confirmed that they are O/A types MEs (Gm: 55.7 μS.cm- 1 and Hm: 76.8 μS.cm-1); their droplet sizes (Gm: 81.9 nm and Hm: 108.0 nm); their polydispersity indexes (Gm: 0.239 and Hm: 0.215) and zeta potential values (Gm: -0.50 mV and Hm: -4.73 mV) confirmed their stabilities and; their pH values (Gm: 4.39 and Hm: 4.13) were compatible with that of the skin and nail. The cytotoxicity test was performed on human lung fibroblasts and it was found that the MEs Gm and Hm are non-toxic (IC50%> 50 μg.mL-1). Therefore, the study obtained two promising microemulsion formulations for the topical treatment of onychomycoses caused by T. rubrum and C. albicans.A onicomicose é uma infecção fúngica de distribuição mundial que causa a destruição da unha (dano estético) e pode prejudicar a qualidade de vida social do paciente, interferindo na sua auto-estima e capacidade funcional. Os principais agentes causadores da doença são a Candida albicans e o Trichophyton rubrum. Atualmente, a resistência fúngica aos fármacos presentes no mercado é uma problemática que vem estimulando a pesquisa por novos medicamentos para o tratamento dessa infecção, e os óleos essenciais tem revelado conter substâncias potencialmente antifúngicas. Sendo assim, este trabalho teve como principal objetivo desenvolver formulações microemulsionadas contendo óleos essenciais para o tratamento de onicomicoses. Inicialmente, testou-se a atividade dos óleos essenciais de oito plantas: Aniba parviflora, Aniba rosaeodora, Aniba canelilla, Ocotea cymbarum, Melissa officinalis (erva-cidreira), Cymbopogon citratus (capim-limão), e Cinnamomum camphora, frente a cepas ATCC de T. rubrum e C. albicans. O método adotado foi a microdiluição em caldo. Os óleos mais ativos contra os fungos foram os de M. officinalis (m) e C. citratus (c), que apresentaram concentrações inibitórias mínimas (CIMs) entre 400 e 800 μg.mL-1 e, por isso, foram selecionados para serem incorporados nas microemulsões (MEs). Antes, realizou-se o teste de miscibilidade para verificar se tais óleos essenciais seriam miscíveis nos insumos escolhidos para compor os sistemas. Então, foram preparadas bases microemulsionadas com diferentes combinações de tensoativos (Tween® 20, Tween® 80 e Kolliphor® EL), cotensoativos (Trascutol® P e os álcoois etílico e isopropílico), fase oleosa (ácido oleico) e água, cujas proporções foram determinadas pela construção de diagramas de fases pseudoternários, os quais também possibilitaram a escolha das melhores regiões de MEs. Os óleos (m e c) foram, então, incorporados como fases oleosas nas formulações bases, obtendo-se um total de vinte MEs que foram submetidas novamente a ensaio antifúngico a fim de verificar e comparar a atividade das MEs bases com as MEs contendo os óleos essenciais frente aos patógenos estudados. Assim, selecionou-se as cinco MEs com maior ação antifúngica – todas contendo o óleo m (Bm, Em, Gm, Hm, e Im) – e realizou-se ensaios físico-químicos e de citotoxicidade. As formulações Gm e Hm foram consideradas as melhores, pois, na caracterização físico-química, seus valores de viscosidade indicaram boa fluidez (Gm: 10,43 cP e Hm: 9,0 cP); transparência, visto que apresentaram índices de refração (Gm: 1,380 e Hm: 1,379) e transmitâncias (Gm: 99,50% e Hm: 99,23%) próximos aos da água; os valores de condutividade elétrica confirmaram que são MEs do tipo O/A (Gm: 55,7 µS.cm-1 e Hm: 76,8 µS.cm-1); os tamanhos de suas gotículas (Gm: 81,9 nm e Hm: 108,0 nm), seus índices de polidispersão (Gm: 0,239 e Hm: 0,215) e os valores de potencial zeta (Gm: -0,50 mV e Hm: -4,73 mV) confirmaram suas estabilidades; e seus valores de pH (Gm: 4,39 e Hm: 4,13) foram compatíveis com o da pele e da unha. O teste de citotoxicidade foi realizado em fibroblastos de pulmão humano e constatou-se que as MEs Gm e Hm são atóxicas (CI50% > 50 µg.mL-1). Portanto, o estudo obteve duas promissoras formulações microemulsionadas para o tratamento tópico de onicomicoses causadas por T. rubrum e C. albicans