Análise dos efeitos do tratamento com o heptapeptídeo angiotensina-(1-7) no controle do processo pró-inflamatório tumoral e na modulação de COX-2 e PTEN em células A549.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-02-04T15:30:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseEfeitosTratamento.pdf: 2287212 bytes, checksum: d7ad35175d859510682177690fcab16f (MD5)Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-02-05T11:59:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseEfeitosTratamento.pdf: 2287212 bytes, checksum: d7ad35175d859510682177690fcab16f (MD5)Made available in DSpace on 2015-02-05T11:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseEfeitosTratamento.pdf: 2287212 bytes, checksum: d7ad35175d859510682177690fcab16f (MD5) Previous issue date: 2014Mundialmente, entre os diferentes tipos de tumores, o câncer de pulmão se destaca como um grave problema de saúde pública. Na busca por terapias inovadoras, várias moléculas estão sendo estudadas, neste contexto, insere-se a Angiotensina-(1-7), que possui propriedades vasodilatadoras, anti-angiogênicas, anti-trombóticas e anti-proliferativas. Recentemente, a Ang-(1-7) vem sendo descrita como um candidato potencial para modular os níveis da proteína ciclooxigenase-2 (COX-2). A enzima COX-2, assume posição de destaque na regulação dos mecanismos moleculares associados ao processo pró-inflamatório tumoral, sendo super-expressa em tumores de pulmão. Outro componente importante no desenvolvimento do processo pró-inflamatório tumoral é a proteína fosfatase e tensina homóloga (PTEN), que em tumores apresenta-se frequentemente deletada e/ou mutada; sendo relacionada por diversos autores com os níveis de expressão da proteína COX-2 em tumores, via modulação da atividade de PI3K/AKT. Baseado nas informações disponíveis na literatura, neste trabalho, procurou-se estabelecer um modelo celular com a finalidade de melhor entender a associação entre os níveis de expressão das proteínas COX-2 e PTEN; e também avaliar o envolvimento de pequenas moléculas reguladoras da expressão gênica destas proteínas. Para isso células A549 foram tratadas com Ang-(1-7) 10-7 M por diferentes intervalos de tempo, e logo após foram realizados ensaios de mensuração de lactato e pH, mensuração da atividade de COX-2, análises da expressão dos transcritos e proteínas COX-2 e PTEN; expressão de microRNAs envolvidos na modulação da expressão de COX-2, PTEN e FOXO-1; análise de expressão gênica de FOXO-1 e das proteínas de adesão Claudina, EPCAM e Integrina _-8. Como resultado, observou-se que o tratamento com Ang-(1-7) induz alterações celulares, dentre elas, um efeito negativo no metabolismo tumoral da linhagem celular A549, diminuindo a produção de ácido lático, elevando assim o pH extracelular; apesar de modular a expressão das proteínas COX-2 e PTEN, não foi identificada uma associação; analisando os miRNAs, não foi possível mostrar uma associação entre estas pequenas moléculas e a expressão de COX-2 e PTEN; Ang-(1-7) promove modulação dos níveis de expressão das proteínas de adesão e FOXO-1, sendo identificada uma sincronia entre o padrão de expressão de FOXO-1 e dos genes das proteínas de adesão investigadas Claudina-1 e EPCAM.Worldwide, between different types of tumors, lung cancer stands out as a serious public health problem. In the search for novel therapies, several molecules have been studied in this context, is part of the Angiotensin-(1-7), which has vasodilator properties, antiangiogenic, anti-thrombotic and anti-proliferative. Recently Ang-(1-7) is described as a potential candidate to modulate levels of protein cyclooxygenase-2 (COX-2). The COX-2 enzyme takes on a prominent position in the regulation of the molecular mechanisms related to tumor pro-inflammatory process, being overexpressed in lung tumors. Another important component in the development of tumor pro-inflammatory process is protein phosphatase and homologous tensin (PTEN), which in tumors are frequently presents mutated or deleted; Several authors are related to the levels of expression of COX-2 protein in tumors via modulation of the activity of PI3K/AKT. Based on the information available in the literature, in this work, we tried to establish a cellular model in order to better understand the association between the expression levels of COX-2 protein and PTEN; and also to evaluate the involvement of small regulatory molecules of gene expression of these proteins. For that A549 cells were treated with Ang-(1-7) 10-7 M for different time intervals, and after testing the measurement of lactate and pH measurement of the activity of COX-2, analysis of the expression of the transcripts were performed and COX-2 and PTEN protein; Expression of microRNAs involved in the modulation of the expression of COX-2 and PTEN FOXO-1; analysis of gene expression of FOXO-1 and adhesion proteins Claudin, EPCAM and Integrin-8. As a result, it was observed that treatment with Ang-(1-7) induces cellular changes, among them a negative effect on tumor cell line A549 metabolism, reducing lactic acid production thereby increasing the extracellular pH; while modulating the expression of COX-2 and PTEN protein was not identified a association; analyzing miRNAs, we could not show a association between these small molecules and the expression of COX-2 and PTEN; Ang-(1-7) promotes modulation of the expression levels of adhesion proteins and FOXO-1, identifying synchrony between the pattern of expression of FOXO-1 and genes of adhesion proteins investigated Claudin-1 and EPCAM