DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO PARA O DIAGNÓSTICO DO COMPLEXO DO PINEAPPLE MEALYBUG WILT-ASSOCIATED VIRUS

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_8805_TESE WALKÍRIA.pdf: 5771036 bytes, checksum: 6f45c5743cc1f2e65059ae28ce2eee7c (MD5) Previous issue date: 2016-09-27O Pineapple mealybug wilt-associated virus (PMWaV) em associação com a cochonilha Dysmicoccus brevipes tem sido reportado como a causa da murcha do abacaxizeiro. A disseminação do vírus ocorre principalmente através de material propagativo infectado e assintomático. Neste trabalho foi validada uma metodologia por PCR em tempo real, como estratégia, para o diagnóstico dos vírus: PMWaV-1, PMWaV-2 e PMWaV-3, em abacaxizeiro. Folhas de plantas adultas e mudas de abacaxizeiro das cultivares Smooth Cayenne, Pérola e Vitória foram analisadas por RT-PCR convencional e em tempo real. Cochonilhas D. brevipes provenientes de plantas com sintomas de murcha também foram analisadas. Genes específicos para cada vírus foram obtidos em resposta a infecção. Análise in silico identificou quatro genes de referência para folhas e material propagativo de abacaxizeiro sob estresse biótico. O vírus PMWaV-3 foi prevalente nas plantas sintomáticas e assintomáticas, enquanto que o PMWaV-2 foi encontrado nos abacaxizeiros assintomáticos, e associado vírus PMWaV-3 nas plantas doentes. O vírus PMWaV-1 não mostrou relação direta com a doença. Observou-se que o estado nutricional da planta interferiu na manifestação dos sintomas e na presença do PMWaV-2. Os três vírus foram detectados em amostras da cochonilha D. brevipes. Confirmou-se também a transmissão dos vírus por esta espécie de cochonilhas, porém, não foi vetor eficiente para o PMWaV-1. Com este estudo disponibilizou-se um método de diagnóstico que atende as exigências fitossanitárias para indexação e certificação quarentenária de mudas comerciais. Isso contribui para prevenir a disseminação do vírus em material propagativo para novas áreas e uma ferramenta para estudo epidemiológico da doença. Essa é a primeira validação de um método rápido, sensível e específico, capaz de detectar os três vírus do PMWaV em plantas em abacaxizeiros assintomáticos e sintomáticas. Palavras chaves: Ananas comosus var. comosus, material propagativo, PCR tempo real, housekeeping, Dysmicoccus brevipes