Patotipos de Escherichia coli diarreiogênica em crianças quilombolas com e sem diarréia, do norte do Espírito Santo

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Diego Martins Lozer.pdf: 3172770 bytes, checksum: 121ced70c4393931318f4497956cf762 (MD5) Previous issue date: 2011-05-27Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorA diarréia permanece como importante problema de saúde pública especialmente em crianças pertencentes às famílias de baixo nível sócio-econômico em países em desenvolvimento, particularmente no Brasil. As cepas de Escherichia coli diarreiogênicas (DEC) estão entre os principais agentes infecciosos bacterianos de diarréia infantil. Seis patotipos de DEC são descritos: E. coli enteropatogênica (EPEC), E.coli enteroinvasora (EIEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli produtora de toxina de Shiga (STEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli de aderência difusa (DAEC). A detecção de DEC tem sido facilitada pelos ensaios em cultura de células bem como por sondas específicas de DNA para cada patotipo de E. coli e usada em ensaios de hibridização. Iniciadores para a PCR também tem sido desenvolvidos para todos os patotipos de DEC. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de cepas de DEC, em crianças menores de 12 anos residentes em Comunidades Quilombolas localizadas nos municípios de São Mateus e Conceição da Barra-Norte do Estado do Espírito Santo. Foram analisadas 425 amostras de fezes de crianças com (n=106) e sem (n=319) diarréia, coletadas entre agosto de 2007 e dezembro de 2009. As fezes foram semeadas em ágar MacConkey e Hektoen, para isolamento de E. coli, Salmonella spp. e Shigella spp. e posterior identificação bioquímica. Todas as cepas de E. coli foram submetidas aos ensaios de PCR monoplex e multiplex para detecção de: tEPEC (eaeA, bfpA), aEPEC (eaeA), EAEC (CVD432), ETEC (lt e/ou st), EIEC (ipaH) e STEC (stx1 e/ou stx2). As cepas isoladas de E. coli também foram submetidas à hibridização de colônia com sondas eae, pAA e afaBC, e ainda, ao teste de adesão a células HEp-2 para identificação dos padrões de aderência AL, AD e AA. E. coli e Shigella spp. foram isoladas de 90% e 1,4%, respectivamente, e nenhum caso de Salmonella spp. foi encontrado nas crianças. O patotipo mais prevalente foi EAEC (43,9%), seguido pela DAEC (18,1%), aEPEC (13,1%), ETEC (2,3%), tEPEC (0,8%), EIEC (0,5%) e nenhuma caso de STEC foi detectado. Das 168 amostras de EAEC com AA, 40,5% foram detectadas por PCR para CVD432 e 25,6% reagiram com a sonda pAA. A sonda afaBC detectou 52,9% dos 69 casos de DAEC. Dentre os patotipos de DEC, somente a DAEC foi significantemente associada à diarréia, 23,6% no grupo diarréia e 13,8% no controle (p=0,022). As infecções mistas foram comuns e também significantemente associadas a crianças com diarréia (p=0,0018)Diarrhea remains an important public health problem for children of low socio-economic level families in developing countries, particularly in Brazil. Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) strains are among the most important bacterial causes of childhood diarrhea. There are six pathotypes of DEC: enteropathogenic E. coli (EPEC), enterotoxigenic E. coli (ETEC), enteroinvasive E. coli (EIEC), shiga-toxin producing E. coli (STEC), enteroaggregative E. coli (EAEC) and diffuse adherent E. coli (DAEC). Detection of DEC has been facilitated by tissue culture assays as well as by DNA probes specific to each group of E. coli and used in hybridization assays. PCR primers have been also developed for all DEC types. The aim of this study was to investigate the presence of DEC strains, in children under 12 years of age living in Quilombolas Communities in São Mateus and Conceição da Barra-north of the Espirito Santo State. A total of 425 stool samples from children with diarrhea (n = 106) and without (n = 319) diarrhea were collected between August 2007 and December 2009. Stool samples were examined for the presence of E. coli, Salmonella spp and Shigella spp with MacConkey and Hektoen agar. All E. coli isolates were screened for the presence of DEC markers by monoplex and multiplex PCRs for detection of tEPEC (eaeA, bfpA), aEPEC (eaeA), EAEC (pCVD432), ETEC (elt and est), EIEC (ipaH), and STEC (stx1 and stx2). E. coli isolates were also tested for colony DNA hybridization with by using the eae, pAA and afaBC probes and by the HEp-2 adhesion assay to identify the LA, DA, and AA adherence patterns. E. coli and Shigella spp were isolated from 90% and 1.4%, respectively, and no Salmonella spp were isolated from any of the children. The most prevalent DEC was EAEC (43.9%), followed by DAEC (18.1%), aEPEC (13.1%), ETEC (2.3%), tEPEC (0.8%), EIEC (0.5%) and 0% EHEC. Of the 168 EAEC with AA, 40.5% were positive with the pCVD432 PCR and 25.6% reacted with the pAA probe. The afaBC probe detected 52.9% of the 69 DAEC isolates with DA. DAEC isolates with DA were detected significantly more often in children with diarrhea (23.6%) than in children without diarrhea (13.8%) (P = 0.022). In this study, isolation of two or more than two DEC types was common and associated with diarrhea (P = 0.0018