Angiotensin II and its association with insulin-like growth factor-I, insulin and follicular cells on bovine oocyte maturation and consequent embryo development

The aim of the present study was to evaluate the action of angiotensin II (Ang II), insulin-like growth factor-I (IGF-I) and insulin (Ins) on bovine oocyte nuclear and cytoplasmic maturation with follicular cells. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured for 22 h with follicular cells and Ang II, IGF-I or Ins. In this experiment, two control groups were used, where the oocytes were cultured with (control with cells) or without (control without cells) follicular cells. Two experiments were performed with these five groups, in the presence or absence of LH and FSH. Only the oocytes cultured in the Ang II group (88.2±1.8 and 90.7±4.3%), respectively without and with LH/FSH) had resumption of meiosis in similar rates than those cultured in the absence of follicular cells (89.7±0.3 and 92.6±2.6; P<0.01). In a second experiment, the action of Ang II and its association with IGF-I or insulin on oocyte meiotic maturation was observed for 7 (germinal vesicle breakdown - GVBD), 12 (metaphase I - MI) and 22 (metaphase II - MII) hours, in a similar experimental design of the previous experiment. The Ang II, Ang II + IGF-I and Ang II + Ins, independent of gonadotrophins, were able to overturns the inhibition of meiotic maturation caused by follicular cells, in the same rates of control group without cells, in the three evaluated period (P<0.01). One last study was performed to investigate the effect of follicular cells, Ang II, IGF-I, Ins and its associations during oocyte maturation on the rate of subsequent embryo development. The oocytes were submitted to maturation similarly to the second experiment for 1 h (1+23 h), 12 h (12+12 h) or 24 h in the presence of follicular cells and its respective treatments + the period to complete 24 h in maturation media. In 1 + 23 h, the cleavage, blastocyst and hatching rates were not different among these five groups. In 12 + 12 h, the oocytes matured in the Ang II + IGF-I group developed into blastocyst (43.8±0.6) and hatching/total oocytes (17.1±1.2) in a higher rates than the others treatments (P<0.05). In 24 h, the association of Ang II + IGF-I improved blastocyst rate in comparison to the others treatments with follicular cells (P<0.05). Also, only in this group hatched blastocysts were obtained after 24 h in the presence of follicular cells. In conclusion, Ang II overturned the inhibitory effect on bovine oocyte nuclear maturation caused by follicular cells, independent of the presence of gonadotrophins, IGF-I and insulin. However, the oocyte cytoplasmic maturation evaluated through embryo development was improved when the Ang II and IGF-I were presents in maturation media with follicular cells for 12 + 12 hours.O objetivo do presente estudo foi de avaliar a ação da angiotensina II (Ang II), fator-I de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) e insulina (Ins) na maturação nuclear e citoplasmática de oócitos bovinos na presença de células foliculares. Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram cultivados por 22 h na presença de células foliculares e Ang II, IGF-I ou Ins. Nesse experimento, foram utilizados dois grupos controles, onde os oócitos foram cultivados na presença (controle com células) ou na ausência (controle sem células) de células foliculares. Dois experimentos foram realizados com esses cinco grupos, sendo um com e outro sem adição de LH e FSH. Somente os oócitos cultivados no grupo Ang II (88,2±1,8 e 90,7±4,3%, respectivamente sem e com LH/FSH) reiniciaram a meiose em índices similares àqueles cultivados na ausência de células foliculares (89,7±0,3 e 92,6±2,6; P<0,01). Em um segundo experimento, foi avaliada a ação da Ang II e sua associação ao IGF-I ou insulina na maturação de oócitos por 7 (rompimento da vesícula germinativa - RVG), 12 (metáfase I - MI) e 22 (metáfase II - MII) horas, em um delineamento similar ao do experimento anterior. A Ang II, Ang II + IGF-I e Ang II + Ins, independente de gonadotrofinas, foram capazes de reverter a inibição da maturação causada pelas células foliculares, nos mesmos níveis do grupo controle sem células (P<0,01), nos três horários estudados. Um último experimento foi realizado para avaliar o efeito das células foliculares, Ang II, IGF-I, Ins e suas associações durante a maturação de oócitos sobre o índice de desenvolvimento embrionário subseqüente. Os oócitos foram maturados em grupos similares aos do segundo experimento por 1 h (1+23 h), 12 h (12+12 h) ou 24 h na presença de células foliculares e seus respectivos tratamentos + o período para completar 24 h em meio de maturação. Em 1 + 23 h, não houve diferença nos resultados de clivagem, blastocistos e eclosão entre os cinco grupos. No sistema 12 + 12 h, os oócitos no grupo Ang II + IGF-I atingiram índices de blastocistos (43,8±0,6) e eclosão/total de oócitos (17,1±1,2) superiores aos outros tratamentos (P<0,05). Em 24 h, a associação de Ang II + IGF-I obteve maiores índices de blastocistos em comparação aos demais tratamentos contendo células foliculares (P