Annexin II gene expression in bovine oocytes and embrionic development

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorThe present study as conducted to examine semiquantitative gene expression of annexin II (ANEII) during all follicular phases of folliculogenesis in bovine, in preantral follicles and oocytes of antral follicles too in different size (9mm in diameter). It was investigated the gene expression of ANEII influenced by retinol during oocyte maturation. In addition we examine annexin II (ANEII) presence during embryonic development and regulation of gene expression to ANEII by retinol and insulin like growth factor (IGF-I) was availed. Bovine ovaries from adults and fetal females was collected in abattoir and cumulus-oocyte complexes and preantral follicles were recovered. mRNA extraction and cDNA formation was carried out to produce ANEII amplification by polymerase chain reaction. Bovine embryos were used at initial phases of development from in vitro production in SOF medium or retinol and/or IGF-I supplemented. Bovine embryos were submitted to mRNA extraction and cDNA formation and ANEII amplification was obtained by polymerase chain reaction (PCR). Preantral follicles at secondary stages presented gene expression to ANEII. Oocytes from different follicular sources in germinal vesicle (GV) stage were significantly different (p<0,05) in gene expression. Gene expression to ANEII in oocytes of larger 8mm follicles were significantly higher than those from 3mm and 5-8mm (p<0,05). The similar results were obtained in metaphase II (MII) phase. However difference was not observed between oocytes from 3mm and 5-8mm follicles. Oocytes from follicles larger 8mm presented higher ANEII expression than those from 3mm follicles, but difference was not observed to the oocytes from 5-8mm (p<0,05). The ANEII gene expression was increase with retinol supplementation during maturation process in contrast to control group (p<0,05). The ANEII was present during early embryonic development except in 16 cells. The rate of embryo production was increased by supplementation with retinol in culture medium (p<0,05) in contrast with control and IGF-I group. The control group (20,5%; 24/117) was similar with IGF-I group (25,8%; 24/93) and both were significantly lower than retinol (37,8%; 45/119). Semi quantitative analyses of ANEII gene expression was significantly higher in control group than retinol or IGF-I embryo treated (p8mm de diâmetro), em embriões de 2, 4, 8, 16 e 32 células e em blastocisto e blastocisto expandido. Além disso, foi investigada a influência do retinol sobre a expressão de ANEII em oócitos e no desenvolvimento embrionário e, neste último, também foi estudada a participação do IGF-I na expressão dessa proteína. Ovários de fêmeas bovinas adultas e de fetos foram coletados em abatedouro e submetidos a punção folicular ou isolamento de folículos pré-antrais. Complexos cumulus-oócito e folículos préantrais foram processados para extração de RNAm, obtenção de cDNA e realizado reação da polimerase em cadeia (PCR) com oligonucleotídeos específicos para ANEII. Foram utilizados embriões bovinos produzidos in vitro em diferentes estádios de desenvolvimento em meio SOF e também suplementados com retinol e IGF-I. Os embriões foram processados para extração de RNAm, obtenção de cDNA e realizada a reação da polimerase em cadeia (PCR) com oligonucleotídeos específicos para ANEII. Apenas folículos préantrais secundários apresentaram expressão de ANEII. Em estádio de vesícula germinativa (VG), os oócitos oriundos de diferentes tamanhos foliculares diferiram entre si (p8mm. Em metáfase II (MII), oócitos de folículos <3mm apresentaram menor expressão de ANEII em relação à oócitos de folículos >8mm (p8mm. O retinol utilizado no período de maturação promoveu um incremento na expressão de ANEII quando comparado ao controle (p<0,05). A ANEII está presente em todos os estádios de desenvolvimento embrionário precoce, com exceção em embriões de 16 células. A utilização de retinol durante o desenvolvimento embrionário, promoveu um incremento significativo (p<0,05) na produção de blastocisto, avaliados no dia 6 após a fecundação, em relação ao grupo controle e ao grupo IGF-I. No grupo controle foi obtido um percentual de 20,5% (24/117) de blastocistos sobre o número total de oócitos cultivados, não diferindo do grupo IGF-I, onde se obteve um índice de 25,8% (24/93) de blastocistos. No grupo retinol, o percentual de blastocisto foi significativamente superior com 37,8% (45/119). Na avaliação semiquantitativa da expressão de ANEII em embriões produzidos em meio suplementado com IGF-I (10ng/ml de meio) ou retinol (0,1ng/ml de meio), foi observado uma menor expressão de ANEII quando estas substâncias estavam presentes no meio em relação ao controle (p