Epidemiologia das infecções hematogênicas por Candida spp. no Hospital Universitário da Universidade Estadual de Londrina e avaliação de antifúngicos e baicaleína na suscetibilidade fúngica

Espécies do gênero Candida são os principais patógenos fúngicos envolvidos em infecções humanas. Frente a emergência de espécies de Candida não-albicans e a ocorrência de resistência intrínseca e adquirida destas leveduras, é necessário um estudo contínuo para analisar possíveis mudanças no perfil de resistência e frequência de espécies, assim como, surge a necessidade de busca de drogas antifúngicas eficazes. Neste estudo os objetivos foram avaliar a frequência de espécies de Candida obtidas de hemoculturas de pacientes internados no Hospital Universitário de Londrina nos anos de 2010 e 2011, analisar a suscetibilidade fúngica por meio da técnica de Microdiluição em Caldo proposta pelo AFST-EUCAST (2008) e avaliar a atividade antifúngica do flavonoide baicaleína frente a isolados de Candida parapsilosis sensíveis e resistentes ao fluconazol. Um total de 68 episódios de candidemia ocorreu nos anos de 2010 e 2011. Candida tropicalis foi a espécie mais frequente (30,9%) seguida por C. albicans (27,9%), C. parapsilosis (22,1%) e C. glabrata (10,3%). Vários fatores de risco parecem estar associados aos episódios de candidemia, destacando o uso prévio de antibióticos (96,5%), a ventilação mecânica (77,2%), e o internamento em unidade de terapia intensiva (75,4%). Os agentes antifúngicos utilizados nos testes de suscetibilidade foram: anfotericina B, fluconazol, itraconazol e voriconazol. Com relação à anfotericina B, apenas um isolado de C. albicans foi resistente (0.98%) entre todos isolados testados. No geral, houve alta suscetibilidade aos azóis, sendo C. glabrata e C. krusei as espécies que apresentaram as maiores Concentrações Inibitória Mínima (CIM). A atividade antifúngica da baicaleína sobre 15 isolados clínicos de C. parapsilosis e o isolado ATCC 22019 foi avaliada por meio da análise de suscetibilidade fúngica e por meio da avaliação da viabilidade celular. A baicaleína apresentou valores de IC50 de 8μg/mL para isolados resistentes ao fluconazol e de 4-8 μg/mL para os sensíveis. Já com relação ao CIM80 foi observada uma variação de 8-32 μg/mL e de 16-32 μg/mL para os isolados sensíveis e resistentes ao fluconazol, respectivamente. O uso combinado de fluconazol e baicaleína resultou em sinergismo para o isolado 357.10 em termos de CIM50. Já em termos de CIM80 sinergismo foi observado para 2 isolados (262.10 e 357.10). Houve redução de 4 vezes na concentração de ambas substâncias para o primeiro isolado e de até 32 vezes para o último. Com relação ao teste de viabilidade celular, os melhores resultados foram obtidos para o isolado 357.10 (resistente a fluconazol) que apresentou viabilidade celular de apenas 15,74% com relação ao controle frente a 32 μg/mL de baicaleína. Os dados obtidos reforçam o aumento de Candida não-albicans no Brasil, entretanto a resistência a anfotericina B, fluconazol, itraconazol e voriconazol entre isolados sanguíneos de Candida ainda é incomum. Os dados obtidos sugerem, ainda, que o flavonoide baicaleína apresenta atividade antifúngica contra isolados de C. parapsilosis independente dos mesmos apresentarem resistência ao fluconazol.Candida species are the main fungal pathogens involved in human infections. Considering the emergence of non-albicans Candida species and the occurrence of intrinsic and acquired resistance of this yeast is necessary a continuous study to analyze possible changes in resistance and frequency of species, as well as, the need arises to search for effective antifungal drugs._ In this study the objectives were to evaluate the frequency of Candida species from blood cultures obtained from patients admitted to the University Hospital of Londrina in the years 2010 and 2011, to evaluate the fungal susceptibility by broth microdilution technique proposed by AFST-EUCAST (2008) and to evaluate the antifungal activity of the flavonoid baicalein against isolates of Candida parapsilosis susceptible and resistant to fluconazole. A total of 68 episodes of candidemia occurred in the years 2010 and 2011. Candida tropicalis was the most frequent (30.9%) followed by C. albicans (27.9%), C. parapsilosis (22.1%) and C. glabrata (10.3%). Several risk factors seem to be associated with episodes of candidemia, highlighting the use of antibiotics (96.5%), mechanical ventilation (77.2%), and hospitalization in the intensive care unit (75.4%). The antifungal agents used in these susceptibility tests were: amphotericin B, fluconazole, itraconazole and voriconazole. Regarding to amphotericin B, only one isolate of C. albicans was resistant (0.98%) among all isolates tested. Overall, there was a high susceptibility to azoles. C. glabrata and C. krusei exhibited the highest minimal inhibitory concentrations (MIC). The antifungal activity of baicalein was evaluated by the employment of fungal susceptibility tests and by cell viability over 15 clinical isolates of C. parapsilosis and ATCC 22019. The baicalein showed IC50 values of 8μg/mL for fluconazole resistant strains and of 4-8μg/mL for susceptible strains. With regard to CIM80 it varied between 8-32 μg/mL and 16-32 μg/mL for fluconazole susceptible and resistant strains, respectively. The combined use of fluconazole and baicalein resulted in synergism for strain 357.10 in terms of MIC50. In terms of CIM80 synergism was observed for two strains (262.10 and 357.10). There was a reduction of 4 times the concentration of both substances to the former strain and up to 32 times to the latter strain. Regarding cell viability, the best results were obtained for the strain 357.10 (fluconazole resistant) that exhibited cell viability of only 15.74% compared to the control when exposed to 32 μg/mL baicalein. The obtained data reinforce the increase of non-albicans Candida species in Brazil, however, resistance to amphotericin B, fluconazole, itraconazole and voriconazole among blood strains of Candida is still rare. The data also suggest that the flavonoid baicalein has antifungal activity against isolates of C. parapsilosis independent of their resistance to fluconazole