Occurrence and idenfication of gastrointestinal protozoans in cats in the city of Londrina, Paraná

Protozoários constituem um grupo de organismos unicelulares amplamente distribuídos na natureza. Diversas espécies são encontradas parasitando o trato digestório de gatos e eventualmente podem ser transmitidas ao homem e causar doenças, tais como, Cryptosporidium parvum, Toxoplasma gondii e Giardia spp. Este trabalho teve como objetivo determinar a ocorrência e identificação de protozoários gastrintestinais em gatos (Felis catus) na cidade de Londrina, Paraná. Das 206 amostras de fezes obtidas, 141 eram de gatos pertencentes a abrigos, 39 de gatos domiciliados e 26 de gatos atendidos no Hospital veterinário da UEL. Todos os proprietários participantes preencheram um questionário epidemiológico para avaliação dos fatores de riscos. As amostras foram processadas, logo após as coletas, pelas técnicas de Willis e Faust para detecção de cistos e oocistos de protozoários, em seguida esfregaços fecais foram corados pela técnica de Ziehl-Neelsen para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. Alíquotas de todas as amostras analisadas nos exames coproparasitológicos foram congeladas para realização da PCR. Foram realizadas as extrações de DNA e todas as amostras submetidas à técnica nested-PCR (nPCR) para identificação de Cryptosporidium spp e Giardia spp. Uma PCR simples foi realizada para identificação de T.gondii. Algumas amostras dos produtos finais da PCR foram selecionadas para o sequenciamento genético. Nos exames coproparasitológicos, Isospora spp foi o protozoário mais prevalente com 11,16%, seguido de Giardia spp com 7,76%, T. gondii com 0,97% e Sarcocystis spp com 0,48%. Todas as amostras foram negativas para Cryptosporidium spp pela técnica de Ziehl-Neelsen. Pela nPCR, uma amostra (0,48%) foi positiva para Cryptosporidium spp e 36 (17,34%) para Giardia spp. Pela PCR foram identificadas 25 (12,13%) amostras positivas para T. gondi. O sequenciamento genético de quatro amostras positivas para Giardia spp mostrou 99% a 100% de identidade genética com a espécie G. duodenalis. Para T. gondii, nove amostras foram sequenciadas e apresentaram similaridade que variou de 89% a 97% quando comparadas com sequências de T. gondii depositadas no Genbank. No caso de Cryptosporidium spp, a única amostra positiva foi sequenciada e o fragmento do gene amplificado demonstrou 100% de identidade com a espécie C. muris. O inquérito epidemiológico revelou significância estatística para o fator acesso a rua quando relacionado à presença de T. gondii (p<0,05). Este estudo demonstrou que G. duodenalis, C. muris e T. gondii estão presentes na população de gatos na cidade de Londrina, Paraná, colocando em risco a saúde da população humana por possuírem um alto potencial zoonótico.Protozoa are a group of unicellular microorganism widely distributed in nature. Many species are founded parasitizing the feline digestive tract and, eventually can be transmitted to humans causing infections, such as, by Cryptosporidium spp, Toxoplasma gondii, and Giardia spp. The aim of this work was to determine the prevalence and molecular characterization of gastrointestinal protozoans of cats (Felis catus) at Londrina city, Parana state. Of the 206 stool samples obtained, 141 were cats belonging to shelters, 39 resident cats and 26 cats treated at the Veterinary Hospital of the UEL. All owners filled an epidemiological questionnaire. Samples were processed shortly, and used in the Willis and Faust techniques to detect cysts and oocysts of protozoans. Thereafter, fecal smears were stained by the Ziehl-Nielsen technique to detect oocysts of Cryptosporidium spp. Aliquots of all analyzed samples in coproparasitological exams were frozen for use in PCR assay. DNA extractions were performed and all samples were submitted to the nested-PCR (nPCR) technique in order to identify Cryptosporidium spp and Giardia spp. A simple PCR was performed to identify T. gondii. Some samples of PCR final products were selected for sequencing. With the coproparasitological exams, the most prevalent protozoa was Isospora spp with 11.18%, followed by Giardia spp (7.76%), T. gondii (0.97%) and Sarcocystis spp (only 0.48%). All samples were negative for Cryptosporidium spp by the Zien-Nelsen technique. By the nPCR, only one sample (0.48%) was positive to Cryptosporidium spp and 36 (17.34%) to Giardia spp; 25 samples (12.13%) were positive by PCR to T. gondii. The sequencing of four samples of Giardia spp revealed 99% to 100% of identity with G. duodenalis. Nine samples were sequenced to determine the presence of T. gondii, and all had similarity that varied from 87% to 99% when compared with the sequences of T. gondii deposited at GenBank. In case of Cryptosporidium, the only positive sample was sequenced and the amplified gene piece DNA showed 100% of identity with C. muris. Epidemiological inquiry revealed statistic significance for the factor ?access to the street? when related with T. gondii presence (p < 0,05). This study demonstrated that infections with G. duodenalis, C. muris and T. gondii are present in the population of cats in the city of Londrina, Paraná, exposing the human population by having a high zoonotic potential