Avaliação da mutagenicidade dos extratos de folha e raiz da planta medicinal coccoloba mollis (polygonaceae) em diferentes sistemas-teste

O uso das plantas medicinais pela população é uma prática antiga e ainda bastante difundida, o que faz com que estudos sobre uma possível atividade mutagênica sejam essenciais. A Coccoloba mollis Casaretto (Polygonaceae) é uma espécie vegetal popularmente pouco conhecida, mas que tem sido utilizada como fitoterápico em Londrina, PR., sendo registrada no Guia Homeopático da Farmácia Q. curatun com o nome de Erva da memória. Este fitoterápico tem sido relatado como benéfico principalmente em casos de falta de memória e estresse. No presente estudo, os extratos etanólicos de folha e raiz da Coccoloba mollis foram avaliados quanto a um possível efeito mutagênico, citotóxico e indutor de apoptose em sistemas-teste in vitro e in vivo. Para a avaliação in vitro foi utilizada a linhagem hepática de Rattus novergicus (HTC) nos ensaios de citotoxicidade (MTT) e mutagenicidade (Cometa e Micronúcleo com bloqueio de citocinese - MNCtB) e; as linhagens TA98 e TA100 de Salmonella typhimurium no ensaio Salmonella/microssoma. In vivo, a mutagenicidade foi avaliada em sangue periférico de camundongos, também através dos ensaios do Cometa e Micronúcleo. Com os resultados obtidos em todos os experimentos pode-se dizer que o extrato preparado a partir das raízes da C. mollis possui maior toxicidade. Esta toxicidade mostrou-se extremamente alta às linhagens de Salmonella investigadas, TA100 e TA98, especialmente quando acrescido a esta última metabolização exógena (S9). No ensaio MTT, em células HTC, o extrato da raiz mostrou-se citotóxico em concentração dez vezes inferior (a partir de 200 μg/mL) a concentração do extrato obtido das folhas da C. mollis (a partir de 2000 μg/mL). À medida que as concentrações de ambos os extratos aumentam mais células entram em apoptose, sendo a maior concentração testada (200 μg/mL) estatisticamente significativa. Os resultados dos experimentos de mutagenicidade in vitro mostram que nenhuma das concentrações empregadas, de ambos os extratos, foi mutagênica às células HTC no ensaio MNCtB, embora tenha sido detectada genotoxicidade na maior concentração avaliada no ensaio Cometa, sugerindo a indução de danos reparáveis. Praticamente, o mesmo ocorreu no ensaio Salmonella/microssoma, no qual nenhuma das concentrações analisadas do extrato da raiz foi capaz de aumentar significativamente o número de revertentes/placa. Entretanto, o extrato da folha foi capaz de induzir danos no DNA da linhagem TA98, na ausência de S9 na maior concentração testada, embora em potência mutagênica muito baixa. Os experimentos realizados in vivo demonstraram que houve um aumento no número de cometas e micronúcleos observados, porém estes resultados não foram significativos estatisticamente. Os dados obtidos sugerem que apesar da baixa capacidade de indução de danos ao DNA nas condições experimentais realizadas, os extratos da C. mollis, especialmente o obtido das raízes, possuem alta toxicidade e capacidade de indução de apoptose. Assim, o conhecimento dos fitoquímicos presentes nestes extratos aliado à investigação mais detalhada sobre efeitos biológicos da Coccoloba mollis seria importante para a comprovação científica dos efeitos propostos popularmente e para proporcionar uma maior segurança aos usuários desta planta medicinal.The use of medicinal plants by population is an ancient and widespread practice, which makes researches about its potential mutagenic activity essential. Coccoloba mollis Casaretto (Polygonaceae) is a vegetal specie not very popularly known, but it has been used as phytotherapic in Londrina, PR, being registred in the Guia Homeopático da Farmácia Q. curatun under the name Erva da memória. This phytotherapic has been reported as beneficial mainly in cases of lacking of memory and stress. In the present study, the ethanolic extracts from the leaf and root from Coccoloba mollis were investigated in relation to their potential mutagenic, cytotoxic and apoptosis inductor effects in in vitro and in vivo testsystems. The in vitro evaluation was made using the hepatic lineage of Rattus novergicus (HTC) in the cytotoxicity (MTT) and mutagenicity (Comet and Micronucleus with cytokinesis block MNCtB) assays and; the strains TA98 and TA100 of Salmonella typhimurium in the Salmonella/microsome assay. In vivo, mutagenicity was evaluated in peripheral blood erythrocytes of mice, also using Comet and Micronucleus assays. The results obtained with all experiments showed that the extract prepared with the roots of C. mollis possesses greater toxicity. The toxicity was extremely high to the investigated Salmonella strains, TA100 and TA98, especially when added to the latter exogenous metabolization (S9). In MTT assay, with HTC cells, the root extract showed cytotocity in concentration ten times lower (since 200 μg/mL) than the concentration of the extract obtained from the leaves of C. mollis (since 2000 μg/mL). With the increase of the concentration of both extracts more cells undergo apoptosis, being the highest concentration tested (200 μg/mL) which is statistically significant. The results of the in vitro mutagenicity experiments demonstrate that none of the evaluated concentration, of both extracts, were mutagenic to HTC cells in MNCtB assay, instead of the genotoxicity detected in the highest concentration of the Comet assay, suggesting induction of repairable damage. Almost the same occurred in Salmonella/microsome, where none of the concentrations analysed of the roots extracts were able to increase the number of revertents/plate significantly. Nevertheless, leaf extract induced DNA damage in TA98 strain in the absence of S9, in the highest concentration evaluated, although in very low mutagenic potency. The in vivo experiments demonstrated that there was an increase in the number of comets and micronuclei observed, however, they were not statistically significant. The data obtained suggested that in spite of the low response in the induction of DNA damage in the experimental tested conditions, the extracts from C. mollis, especially the root one, possesses high toxicity and potential to induce apoptosis. Thus, the knowledge of the phytochemicals present in these extracts ally with a deeper investigation about the biological effects of Coccoloba mollis would be important to the scientific confirmation of the popularly proposed effects and to provide greater security to people that have being used this medicinal plant