Antigens of Paracoccidioides sp. in urine and its correlation with serum antibodies against P. brasiliensis and P. lutzii in human paracoccidioidomycosis

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pela espécie fúngica Paracoccidioides brasiliensis (espécies cripticas S1, PS2, PS3 e PS4) e pela nova espécie, Paracoccidioides lutzii. O trabalho teve como objetivo determinar os níveis de antígenos totais de Paracoccidioides spp. e de gp43 (principal antígeno do P. brasiliensis) na urina de pacientes com PCM, correlacionando com os níveis de anticorpos séricos para P. brasiliensis (espécies críptica S1, cepa B339), (espécies críptica PS2, isolado LDR3) e P. lutzii (isolado LDR2). Na primeira etapa, foram utilizadas urinas de pacientes com suspeita de PCM (n= 44), para determinadação dos níveis de antígenos totais (CFA) foram utilizados anticorpos policlonais contra P. brasiliensis (B339) e contra P. lutzii (LDR2). Os níveis de gp43 foram determinados com anticorpos monoclonais contra gp43 de P. brasiliensis (ensaio imunoenzimático competitivo indireto- icELISA e de inibição- inhELISA), em paralelo procedeu-se a sorologia para PCM empregando ELISA indireto (iELISA) e imunodifusão (ID) com ExoAg B339. A positividade dos testes foi: 48% (anti-339) e 73% (anti-LDR2) de antígeno total na urina, 33,33% gp43 na urina, 87,5% sorologia por iELISA e 43,5% por ID. Não foi observada correlação entre o nível de antigeno total utilizando anticorpos anti-339 e anti-LDR2. Foram detectados casos de resultados negativos por sorologia (ELISA= 1, ID= 2) e com positividade para antigenos na urina. Na segunda etapa, foi calculada a correlação de Pearson (PCM n= 10) entre os níveis de antigenos totais ou de gp43 na urina e a reatividade sérica de IgG aos antígenos CFA ou de gp43 provenientes de P. brasiliensis S1, PS2 e P. lutzii (iELISA). Houve uma correlação positiva entre o nível de antígeno total determinado com anti-LDR2 e anticorpos a diferentes fontes de CFAs (S1, LDR2 e LDR3) (r >0,5), mas apenas com antigeno total determinado via anti-339 e reatividade de IgG sérica com CFA proveniente de LDR2 (r >0,5) e entre gp43 (?g/mL) e IgG anti-gp43 proveniente de LDR3 (r >0,5). Em conclusão, o diagnóstico serológico por iELISA seguido de ID é mais eficiente do que a detecção de antígenos urinários, mas o último pode aumentar a cobertura de diagnóstico, particularmente no caso de níveis baixos de anticorpos. A utilização de anticorpos contra o fungo LDR2 (P. lutzii) é mais eficiente na detecção de antígenos totais na urina que com anticorpos anti-Pb339 (P. brasiliensis S1) e as diferenças nas correlações entre os níveis de antígenos totais ou de gp43 com as reatividades de anticorpos a diferentes antígenos de Paracoccidioides spp. pode ser devido a diferenças entre as cepas infectantes.Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (cryptic species S1, PS2, PS3 and PS4) as well as the new species, Paracoccidioides lutzii. This study evaluated the urinary P. brasiliensis total soluble antigens (CFA) and gp43 (main P. brasiliensis antigen) in patients with PCM, and correlate with the levels of serum antibodies against P. brasiliensis (S1= strain B339, PS2= clinical isolate LDR3) and P. lutzii (clinical isolate LDR2). First, urine from patients with PCM or suspected (n= 44) were evaluated for total antigens by using polyclonal antibodies against P. brasiliensis (S1= B339) and P. lutzii (LDR2) as well as gp43 levels by using monoclonal antibodies to P. brasiliensis gp43 (competitive indirect- icELISA and inhibition enzyme-linked immunosorbent assay- inhELISA), together with serology for PCM (indirect ELISA= iELISA and immunodiffusion= ID to B339 ExoAg). The positivity of the tests was: 48% (anti-339) and 73% (anti-LDR2) urinary total antigen, 33,33% urinary gp43, 87,5% serology by iELISA and 43,5% by ID. No correlation was observed between the total antigen level using anti-339 and anti-LDR2. Negative serology (iELISA= 1, ID= 2) and positive for antigens in the urine cases were detected. In the second step, Pearson?s correlation was calculated (PCM n= 10) between the levels of urinary total antigens or gp43 and the sera reactivity CFA or gp43 derived from P. brasiliensis S1, PS2 and P. lutzii (iELISA). It was detected positive correlation between total antigen level determined with anti-LDR2 and IgG reactivity to all different CFAs sources (S1, LDR2, LDR3) (r >0.5) but only with antigens levels determined by anti-339 and IgG reactivity to CFA from LDR2 (r >0.5) and also only between gp43 (?g/mL) and IgG reactivity to gp43 from LDR3. Summering, the serological diagnosis by iELISA followed by ID is more efficient than detection of urinary antigens, but the latter could increase the diagnostic coverage, particularly in cases of low antibody levels. The use of antibodies against fungus LDR2 (P. lutzii) is more efficient than antibodies to Pb339 (P. brasiliensis S1) for urinary total antigens determinations and the differences in the correlations tests between the total antigen or gp43 levels and antibodies reactivity to different antigens of Paracoccidioides sp. may be due to differences in the infective strains