Análise de variantes alélicas de genes de reparo e expressão de genes relacionados com resistência à cisplatina em carcinoma bucal

Este trabalho objetivou investigar a associação entre a presença de variantes alélicas nos genes XRCC1 e XRCC3 e a suscetibilidade ao câncer de boca e correlacionar os resultados dos testes genéticos com parâmetros histopatológicos. Adicionalmente, implementar técnicas de análise de expressão gênica no laboratório de Mutagênese e Oncogenética da UEL pela realização de experimentos com uma linhagem celular de carcinoma bucal tratada com cisplatina, avaliando genes de reparo do DNA (ERCC1 e XPA) e de apoptose (BAX). A genotipagem das variantes genéticas foi realizada por PCR-RFLP em 150 pacientes com carcinoma bucal e 150 controles. Os SNPs investigados foram Arg194Trp e Arg399Gln no gene XRCC1 e Thr241Met no gene XRCC3. Para a análise de expressão foi utilizada a linhagem SCC25 tratada com cisplatina na concentração de 0,01 µM. O RNA total foi extraído e a quantificação relativa foi realizada por PCR em Tempo Real. A presença das variantes polimórficas de XRCC1 códon 194 (OR 0,82, 95% IC 0,44-1,51), códon 399 (OR 0,94, 95% IC 0,59-1,50) e XRCC3 (OR 0,72; 95% IC 0,45-1,16) não foram significativamente associadas com aumento de risco de câncer bucal isoladamente ou em combinações genotípicas. Os genótipos variantes também não se mostraram associados a parâmetros histopatológicos: diferenciação tumoral, invasão de linfonodos e tamanho do tumor. Na análise de expressão gênica, apenas o gene XPA mostrou expressão aumentada, indicando que pode conferir uma diminuição da sensibilidade à cisplatina da linhagem celular utilizada neste estudo. Entretanto, os dados de expressão são preliminares e serão confirmados com análises adicionais, que também incluirão novos genes. Nossos resultados sugerem ainda que variantes polimórficas nos genes XRCC1 e XRCC3 não constituem bons marcadores de suscetibilidade para carcinomas orais e também não estão associadas a estágios mais avançados do processo tumoral.This study aimed to investigate the association between the presence of allelic variants in XRCC1 and XRCC3 genes and susceptibility to oral cancer and to correlate the results of genetic tests with histopathological parameters. Additionally, implementing technical analysis of gene expression in the laboratory of Mutagênese e Oncogenética at UEL, conducting experiments with a cell line of oral carcinoma treated with cisplatin, evaluating the DNA repair genes (ERCC1 and XPA) and apoptosis genes (BAX). Genotyping by PCR-RFLP was carried out on 150 patients with oral squamous cell carcinoma and 150 controls. SNPs investigated included Arg194Trp and Arg399Gln of the XRCC1 gene and Thr241Met of the XRCC3 gene. To analyze the expression was used the cell line SCC25 treated with cisplatin at a concentration of 0.01µM. Total RNA was extracted and relative quantification was performed by Real Time PCR. Presence of the polymorphic variant of XRCC1 codon 194 (OR 0.82, 95% CI 0.44-1.51), codon 399 (OR 0.94, 95% CI 0.59-1.50) and XRCC3 (OR 0.72; 95% CI 0.45-1.16) were not significantly associated with increased risk of oral cancer alone or in combination genotype. Genotypes variants also were not associated with histopathological parameters: tumor differentiation, invasion of lymph nodes and tumor size. In the analysis of gene expression, only the XPA gene showed increased expression, indicating that it may provide a decreased sensitivity to cisplatin of the cell line used in this study. However, the expression data are preliminary and will be confirmed with additional analysis, which also include new genes. Our results also suggest that polymorphic variants in genes XRCC1 and XRCC3 are not good markers of susceptibility to oral carcinomas and are also not associated with later stages of the tumor