Caracterização de isolados de Bacillus thuringiensis com potencial para controle de Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) (Diptera: Culicidae)

Aedes aegypti (Linnaeus), principal vetor do vírus da febre dengue no Brasil, tem sido combatido com o uso maciço de produtos químicos, contribuindo com o aparecimento de populações resistentes, dificultando ainda mais o controle do inseto. Atualmente uma alternativa para este controle é a utilização de bioinseticida a base de Bacillus thuringiensis israelensis. A atividade larvicida desta linhagem está relacionada com a produção de inclusão parasporal que é sintetizada durante a esporulação. Estes cristais protéicos são compostos por variações de proteínas Cry e Cyt. Estas proteínas são sintetizadas na forma de protoxinas, portanto, sua ação depende da ativação, a qual ocorre no intestino do inseto mediante a alcalinidade do meio. A ação destas toxinas causa a paralisia do aparelho digestório, ocasionando morte por inanição, paralisia geral dos músculos e septicemia. Diante de diversas vantagens apresentadas pelos bioinseticidas, vários trabalhos são desenvolvidos com o intuito de isolar novas linhagens bacterianas com potencial entomopatogênico. Para estes estudos utiliza-se metodologias como a caracterização genética, que possibilita discriminar isolados bacterianos através do conhecimento de seu genoma. A técnica utilizada é a de Reação de Cadeia da Polimerase (PCR) que envolve a síntese enzimática in vitro de um segmento específico de DNA na presença da enzima DNA polimerase e com a aplicação de iniciadores ("primers") que delimita as sequencias específicas. Esta técnica permite estudos de diversidade de linhagens propiciando o isolamento de novos agentes biológicos com potencial entomopatogênico. A forma de teste in vivo da real atividade tóxica sobre o inseto é a metodologia de bioensaio, que consiste em expor os seres vivos alvo a uma determinada substância, sob condições controladas.Aedes aegypti (Linnaeus, 1762), the main vector of dengue fever in Brazil, has been controlled by the massive use of chemical products. This technique has fostered the upsurge of resistant mosquito populations and hindered the control of the insect. Currently, bioinsecticides containing Bacillus thuringiensis israelensis Berliner are an alternative for vector control. The larvicidal activity of the lineage is related to the production of parasporal inclusion, which is synthesized during sporulation. These proteic crystals are made of variations of the Cry and Cyt proteins, which are synthesized as protoxins; therefore, their action depends on the activation caused by the medium alkalinity of the intestinal tract of the insect. These toxins cause paralysis of the digestive system, leading to death by inanition, generalized muscle paralysis, and septicaemia. The advantages of bioinsecticides have led to significant efforts to isolate new bacterial lineages with entomopathogenic potential. One of the methodologies used in such studies is genetic characterization, which allows for the discrimination of bacterial isolates according to genome. The technique used is Polymerase Chain Reaction (PCR), which consists of in vitro enzymatic synthesis of a specific DNA segment in presence of the DNA polymerase enzyme and the application of primers to determine specific sequences. This technique allows for studies on lineage diversity leading to the isolation of new biological agents with entomopathogenic potential. The bioassay methodology consists of in vivo tests of the actual toxic effect of a specific product on live specimens, under controlled conditions