Characterization and clonotyping of antigen specific T lymphocytes in patients with neurocryptococcosis and exposed individuals

A neurocriptococose é uma infecção causada por fungos do gênero Cryptococcus spp. O C. neoformans afeta principalmente indivíduos imunossuprimidos, particularmente, pacientes portadores da síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), enquanto o C. gattii afeta geralmente indivíduos imunocompetentes sem histórico prévio de doenças ou de alguma outra forma de comprometimento do sistema imune. Neste estudo foi produzido um lote de antígenos a partir das cepas de C. neoformans (VNI-VNIV) e C. gattii (VGI-VGIV) para avaliação da secreção de IFN- pelo método Elispot após estímulos com os antígenos de C. neoformans e C. gattii em células mononucleares de sangue periférico de quatorze indivíduos controles saudáveis sendo: cinco ecoturistas, dois micologistas, três tratadores de aves, e quatro indivíduos sem relatos de atividades ocupacionais relacionadas a frequente exposição ao fungo. Os resultados mostraram aumento significativo da secreção de IFN- no grupo de ecoturistas, micologistas e tratadores de aves em relação ao grupo de indivíduos sem relato de exposições ocupacionais a esses agentes. Nossos resultados sugerem que o aumento significativo da secreção de IFN- pode estar relacionado com as contínuas exposições ao fungo a que esse grupo se submete, assim como com resposta imunológica de memória antígeno específica desenvolvida durante a exposição aos Cryptococcus. Neste estudo também avaliamos, por citometria de fluxo, a população de linfócitos T CD4+ e subpopulações quanto ao estado de ativação e maturação de oito pacientes hospitalizados com neurocriptococose e oito indivíduos controles saudáveis. Os pacientes apresentaram aumento significativo das subpopulações T CD4+, T regulatória CD4+CD25+CD127low, CD4+CD25+CD127+high, células T CD4+CD45RA+CCR7- de memória efetora terminalmente diferenciada (TEMRA) e CD4+CD45RA-CCR7- de memória efetora (TME). Observamos ainda diminuição significativa dos linfócitos totais, células T CD4+CD45RA+CCR7+ (naïve) e CD4+CD45RA-CCR7+ de memória central (TMC). As células T CD4+ e T CD4+ não mostraram diferenças estatísticas significativas entre os grupos de estudo. Esses resultados sugerem que a resposta imunológica desses pacientes esteja sofrendo alterações na maturação e diferenciação dos linfócitos T e pode estar relacionado com os fatores de virulência do fungo que interferem em diversos mecanismos das células tanto da resposta imune inata como adaptativa, assim como com possíveis distúrbios de regulação entre as respostas imunes Th1 e Th2 durante a infecção por CryptococcusNeurocriptococcosis is an infection caused by fungi of the genus Cryptococcus spp. C. neoformans mainly affects immunosuppressed individuals, particularly patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), while C. gattii generally affects immunocompetent individuals without prior history of disease or any other form of impairment of the immune system. This study produced a lot of antigens from strains of C. neoformans (VNIVNIV) and C. gattii (VGI-VGIV) for evaluation of IFN- secretion by Elispot method after stimulation with C. neoformans antigens and C. gattii in peripheral blood mononuclear cells of fourteen healthy control subjects, being: five ecotourists, two mycologists, three poultry keepers, and four individuals without reports of occupational activities with frequent exposure to the fungus. The results showed a significant increase in IFN-secretion in the group of ecotourists, mycologists and bird keepers in relation to the group of individuals without reports of occupational exposures to these agents. Our results suggest the significant increase in IFN- secretion may be related to the continuous exposure of these groups of individuals to the fungus, as well as to the specific antigen memory immune response developed during exposure to Cryptococcus. In this study we also evaluated by flow cytometry, the population of CD4+ T lymphocytes and subpopulations as to the activation and maturation status of eight hospitalized patients with neurocriptococcosis and eight healthy control subjects. The patients showed a statistically significant increase in the subsets T CD4+, regulatory T CD4+CD25+CD127low, CD4+CD25+CD127+high, CD4+CD45RA+CCR7- terminally differentiated effector memory cells (TEMRA) and CD4+CD45RA-CCR7- effector memory (TEM). Significant decrease in total lymphocytes, CD4+CD45RA+CCR7+ cells (naïve) and CD4+CD45RA-CCR7+ central memory (TCM). The T CD4+ and T CD4+ cells did not show significant statistic difference between the studied groups. These results suggest that the immune response of these patients is being affected in the maturation and differentiation of T lymphocytes, which may be related to fungal virulence factors that interfere with several cell mechanisms, affecting both innate and adaptive immune responses, as well as possible regulatory disorders of Th1 and Th2 immune responses during Cryptococcus infectio