The analysis of cell cycle proteins expression in patients with renal cell carcinoma

Karcinom bubrežnih ćelija je najčešći maligni tumor bubrega, naročito muške populacije. U odnosu na klasifikaciju, koja obuhvata brojne histološke varijante, kao i činjenicu da ne postoji specifičan tumor marker, cilj ove doktorske disertacije bio je da se analizira imunohistohemijska ekspresija odabranih proteina koji regulišu ćelijski ciklus (ciklina A, ciklina B, ciklina D1, p16 i p57) u uzorcima iz tumora nakon nefrektomije na Klinici za urologiju Kliničkog centra Srbije i odeljenju urologije Kliničko-bolničkog centra „Dr Dragiša Mišović“ u Beogradu u periodu od 2010. do 2013. godine, da se ispita metodom qRT-PCR ekspresija gena koji kodiraju ove proteine (CCNA, CCNB, CCND, CDKN2A, CDKN1C) na DNK izolovanoj iz parafinskih kalupa, kao i da se ispita međusobna korelacija dobijenih rezultata u odnosu na kliničko-morfološke parametre (pol, starost, nuklearni gradus, stadijum bolesti, veličinu tumora, preživljavanje). Ova retrospektivna studija uključivala je 74 pacijenta sa, u proseku, tumorom srednje veličine, svetloćelijskim histološkim tipom, nižim gradusom i nižim TNM stadijumom bolesti. Imunohistohemijski metod je pokazao visok nivo ekspresije ciklina A kod starijih pacijenata ženskog pola, sa većim dijametrom tumora, višim gradusom i višim TNM stadijumom, bez statističke značajnosti, i značajnu ekspresiju u papilarnom histološkom tipu i kod pacijenata sa smrtnih ishodom. Ekspresija CCNA je pokazala normalan nivo ili duplikaciju jednako u grupi visokog gradusa. Ekpresija ciklina D1 opada sa povećanjem starosne kategorije i dimenzije tumora, slična je kod višeg i nižeg stadijuma, razlika prema gradusu je blizu konvencionalnog nivoa značajnosti. Najveći procenat pacijenata koji ima ekspresiju ciklina D1>10% su oni sa svetloćelijskim tipom, što je statistički značajno. Ekspresija CCND je pokazala značajnost koja je blizu konvencionalne kod papilarnog histološkog tipa- trećina bolesnika imala je deleciju gena. Ekspresija p16>10% je pronađena kod svih pacijenata sa papilarnim RCC (p<0.001). Ekspresija p16 je pokazala trend rasta sa povećanjem starosne kategorije i dimenzija tumora. Broj umrlih bio je veći u grupi pacijenata sa p16>10%, i to je zanimljiv rezultat, jer je p16 tumor supresor. Razlika u ekpresiji CDKN2A je na konvencionalnom nivou značajnosti (isključeni pacijenti sa duplikacijom), postoji statistički značajna razlika između tri grupe ekspresije CDKN2A gena (delecija i normalan nalaz) u korelaciji sa histološkim tipom. Smrtni ishod je bio manje učestao kod pacijenata sa delecijom, bez statističke značajnosti. Pacijenti sa normalnom ekspresijom CDKN1C uglavnom su imali p57 >5% (jedan slučaj sa duplikacijom i p57<5%)...Renal Cell Carcinoma is the most common renal malignant tumor, especially within male population. According to renal cell carcinoma classification, which considers many histological variants and the fact there is no specific tumor marker, the aim of this doctoral dissertation was to analyze the immunohistochemical expression of cell cycle regulatory proteins (cyclin A, cyclin B, cyclin D1, p16 and p57) in tumor samples after nephrectomy on Urology Clinic of Clinical Center of Serbia and Urology department of Clinical-hospital Center „Dr Dragisa Misovic“ in Belgrade from 2010 to 2013, to analyze qRT-PCR expression of genes encoding these proteins (CCNA, CCNB, CCND, CDKN2A, CDKN1C) on DNA isolated from paraffin blocks, and to correlate the results in relation to clinical-pathological parameters (sex, age, nuclear grade, stadium, tumor size and survival). This retrospective study included 74 patients with in average middle-sized tumors, clear cell histological type, low-grade and low TNM stadium. Immunohistochemical method showed high level of cyclin A expression in older, female patients, with large tumor size, high grade, and high TNM stadium, without statistical significance, and significant expression in papillary histological type and in patients with deadly outcome. CCNA expression had normal expression level and duplication equally in the group with high-grade RCC. Cyclin D1 expression was lower contrary to tumor size and age, it is alike in lower and higher stadium, but difference according to grade was near to conventional level of significancy. Most patients with cyclin D1>10% expression had clear cell type, which was statistically significant. CCND expression was near to conventional significancy in papillary histological type- third of patients had deletion of CCND gene. p16>10% expression was found in all the patients with papillary RCC (p<0.001). p16 expression was higher in older patients and bigger tumor size. We had more patients with deadly outcome in group with p16>10%, and this is an interesting result, considering p16 is tumor suppressor protein. The difference in CDKN2A expression had conventional level of significance (patients with duplication were excluded), there is a statistically significant difference between three groups of CDKN2A gene expression (deletion and normal result) correlated to histological type. Deadly outcome was less often in patients with gene deletion, without statistical significance..