Comparison of immunoglobulin G isolation methods from human blood plasma in the determination of N-glycan progile by CGE-LIF analysisi

Glikozilacija je važna posttranslacijska modifikacija proteina koja ih oplemenjuje novim svojstvima te utječe na njihovu stabilnost i funkciju. Promjene u glikozilaciji proteina krvne plazme odnosno seruma primjećene su kod mnogih autoimunih bolesti i karcinoma. Jedan od takvih proteina je i imunoglobulin G (IgG), ključna molekula u obrani našeg organizma, a čiji su pripadajući N-glikani dosad pokazali snažan potencijal kod uporabe u dijagnostičke i prognostičke svrhe. Kako bi se ispitala N-glikozilacija IgG-a, ključan korak je njegovo pročišćavanje odnosno izolacija iz kompleksne smjese proteina krvne plazme i drugih sastojaka. Danas se u tu svrhu najčešće koristi afinitetno pročišćavanje uz pomoć proteina G u različitim formatima, no dostupne su i druge metode. Usporedbom tri metode izolacije IgG-a (protein G vezan za monolit, protein G vezan za agarozna zrnca, Melon Gel), Melon Gel se pokazao kao najbolja alternativa izolaciji IgG-a proteinom G vezanim za monolit pločice, metodi danas široko rasprostranjenoj u visoko-protočnoj N-glikanskoj analizi IgG-a.Glycosylation is an important posttranslational modification of proteins that enriches them with new properties and affects their stability and function. Changes in glycosylation of blood plasma or serum proteins have been observed in many autoimmune diseases and cancers. One of such proteins is immunoglobulin G (IgG), a key molecule in the defense of our body, whose associated N-glycans have shown strong potential for use in diagnostic and prognostic purposes. In order to examine the Nglycosylation of IgG, a key step is its purification or isolation from a complex mixture of blood plasma proteins and other ingredients. Today, affinity purification using protein G in various formats is most commonly used for this purpose, but other methods are also available. By comparing three methods of isolating IgG (protein G bound to a monolith, protein G agarose beads, Melon Gel), Melon Gel proved to be the best alternative to isolating IgG with protein G monolithic plate, a method widely used today in high-flow N-glycan analysis of IgG