Molecular identification of Vibrio genus bacteria from bivalve aquaculture sites in Eastern Adriatic

Rod Vibrio sadrži važne patogene školjkaša i drugih beskralješnjaka, riba i ljudi. Kako bi se očuvalo njihovo zdravlje bitna je njihova identifikacija do razine vrste. Cilj ovog istraživanja je bio identificirati odabrane Vibrio uzorke do razine vrste, odrediti filogenetske odnose i utvrditi sličnosti, tj. razlike u strukturi zajednica Vibrio bakterija između akvakulture školjkaša Limskog kanala i Malostonskog zaljeva. Analizirani su uzorci morske vode, sedimenta kao i tkiva školjkaša mediteranske dagnje (Mytilus galloprovincialis) i europske plosnate kamenice (Ostrea edulis). Metodom lančane reakcije polimerazom (PCR) ciljane su različite kodirajuće regije šest konstitutivno eksprimiranih gena (engl. housekeeping genes) i 16S rRNA. Uzorci su poslani na sekvenciranje nakon čega je provedena metoda multilokusnog sravnjivanja sljedova (MLSA). Za filogenetsku analizu korištene su metode najveće vjerojatnosti i susjednog sparivanja. Eksperimentalni uzorci unutar Harveyi podskupine su se razlučili do razine vrste, a unutar Splendidus podskupine do razine grupacije. Na području uzgajališta školjkaša Limski kanal identificirano je šest vrsta te pet Splendidus grupacija, dok je na području uzgajališta školjkaša Malostonski zaljev identificirano pet vrsta i šest Splendidus grupacija. Dokazana je prisutnost više patogenih i uvjetno patogenih Vibrio vrsta za na području istočnog Jadrana.The genus Vibrio consists of important shellfish and other invertebrate, fish and human pathogens. In order to preserve their health, identification to species level is essential. The aim of this study was to identify selected Vibrio samples to species level, to determine phylogenetic relationships and to determine similarities and differences in the structure of the Vibrio community between the shellfish aquaculture of the Lim Bay and Mali Ston Bay. Samples of seawater, sediments, tissues of Mediterranean mussel (Mytilus galloprovincialis) and European flat oyster (Ostrea edulis) were analyzed. Different coding regions of six housekeeping genes and 16S rRNA were targeted by the polymerase chain reaction (PCR). Samples were sent for sequencing after which a multilocus sequence alignment (MLSA) was performed. For phylogenetic analysis two methods were used: Maximum likelihood and Neighbour-joining. Experimental samples within the Harvey clade were identified to the species level while experimental samples within the Splendidus clade to the grouping level. In Lim Bay, six species and five Splendidus groups have been identified, while five species and six Splendidus groups in Mali Ston Bay. The presence of several pathogenic and conditionally pathogenic Vibrio species in the eastern Adriatic has been proven