Sugars and amides in the sperm cell cryopreservation of Curimba, Prochilodus lineatus

The aim of this study was to evaluate dimethylsulfoxide (DMSO 10%), dimethylformamide (DMF) and dimethylacetamide (DMA) amides at concentrations of 2, 5, 8 and 11%, as well as trehalose, sucrose, lactose and raffinose sugars at 0, 50, 100, 150 mM, as cryoprotective agents in Prochilodus lineatus semen. The semen of the animals was collected through abdominal massage, being hormonally induced with carp pituitary extract 12h before extrusion. Then, the collected samples were diluted in the different treatments and then frozen. Post-thawing cell kinetics analyzes were performed by Computer Assisted Semen Analysis - CASA (motility period, DAP, DCL, DSL, VAP, VCL, VSL, STR, LIN, WOB, ALH, BCF, total and progressive motility). Biochemistry and cell organelles: DNA fragmentation index (DFI), membrane integrity, mitochondrial functionality, membrane fluidity, reactive oxygen species (ROS) production and lipid oxidation by flow cytometry. Shapiro - Wilk normality test was performed, with subsequent analysis of variance through the Kruskal Wallis test, due to the fact that the data did not behave in a parametric way. In the work with amides we found that DMF at concentrations 2 and 8% are efficient as cryoprotectants, with better responses than control (DMSO 10%). In the sugar experiment, the motility period parameter at 100 mM trehalose concentration showed superior results to the control, differing statistically. Sucrose, lactose and raffinose sugars were not efficient for curimba cryopreservation, presenting results that were not statistically different from the control (DMSO10%).Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESO objetivo desse estudo foi avaliar as amidas dimetilsulfóxido (DMSO 10%), dimetilformamida (DMF) e dimetilacetamida (DMA) nas concentrações de 2, 5, 8 e 11 %, bem como os açúcares trealose, sacarose, lactose e rafinose nas concentrações de 0, 50, 100, 150 mM, como agentes crioprotetores no esperma da espécie Prochilodus lineatus. O esperma desses animais foi coletado através de massagem abdominal, sendo induzidos hormonalmente com extrato de hipófise de carpa 12h antes da extrusão. Em seguida, as amostras coletadas foram diluídas nos diferentes tratamentos e após foram congeladas. Pós-descongelamento foram feitas análises de cinêtica celular pelo Computer Assisted Semen Analysis - CASA (período de motilidade, DAP, DCL, DSL, VAP, VCL, VSL, STR, LIN, WOB, ALH, BCF, motilidade total e progressiva), análise bioquímica e das organelas celulares: Indice de fragmentação do DNA (DFI), integridade de membrana, funcionalidade mitocondrial, fluidez de membrana, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e oxidação lipidica, através de citometria de fluxo. Foi realizado o teste de normalidade de Shapiro – Wilk, com posterior analise de variância através do teste de Kruskal Wallis, devido os dados não se comportarem de forma paramétrica. No trabalho com as amidas constatamos que DMF nas concentrações 2, e 8 % são eficientes como crioprotetores, com respostas melhores que o controle (DMSO 10%). No experimento com açúcares, o parâmetro período de motilidade na concentração de 100 mM da trealose mostrou resultados superiores ao controle, diferindo estatisticamente. Os açúcares sacarose, lactose e rafinose não mostraram-se eficientes para criopreservação de curimba, apresentando resultados que não foram estatisticamente diferentes do controle (DMSO10%)