Effects of Cryphonectria parasitica infection by CHV1 hypovirus in the pathogenesis‐related OAH activity

Mestrado de dupla diplomação com a University Hassiba Benbouali ChlefCryphonectria parasitica, the causal agent of chestnut blight, causes necrotic lesions (cankers) on the bark of stems and branches of susceptible host trees leading to wilting of the plant part distal to the infection. Cryphonectria hypovirus 1 (CHV1) infects C. parasitica and reduces the fungus virulence (hypovirulence). The interaction between C. parasitica and CHV1 has been studied intensively at the molecular level. In addition to the reduced virulence the CHV1 infected strains also display other phenotypic symptoms, including reduced pigmentation and sporulation. It has been shown that CHV1 generates these phenotypic changes by interfering with parasitic sign transduction pathways. After infection and mycelium spread, wound periderm formation is continuously inhibited in susceptible chestnut species because the advancing mycelial fans stop the host cells by means of toxins and cell wall‐degrading enzymes. The oxalic acid is one of the metabolites which is associated in this process. It has a toxic effect on host cells and is creted by C. parasitica at the advancing edge of the infection. The objectives of this work were to evaluate the oxalic acid production, in microbiological culture medium of wild type virulent C. parasitica and in hypovirulent isogenic strains. The evaluation of the virulence of C. parasitica, virulent and hypovirulent isolates was performed by inoculation in young branches of C. sativa. This method allows us to characterize the degree of virulence of six virulent isolates; Cast13, VBC02, Cast26, Cast13, Cast17, Cast 07, VDP 11 and hypovirulent converted by RBB 111. Determination of oxalic acid by spectrophotometry allows us to evaluate production of oxalic acid in each virulent isolate and their converted ones.Cryphonectria parasitica, o agente causal do cancro do castanheiro, causa lesões necróticas (cancros) na casca dos ramos e troncos das árvores hospedeiras suscetíveis, levando à morte da parte da planta distal à infeção. Cryphonectria hypovirus 1 (CHV1) infeta C. parasitica e reduz a virulência do fungo (hipovirulência). A interação entre C. parasitica e CHV1 foi estudada intensamente ao nível molecular. Além de virulência reduzida as estirpes de C. parasitica infetadas por CHV1 também apresentam alterações fenotípicas, incluindo pigmentação e esporulação reduzidas. Foi demonstrado que o CHV1 atua nessas mudanças fenotípicas interferindo nas vias de transdução do fungo parasita. Após a infeção e a colonização dos tecidos pelo micélio do fungo, a formação da periderme da ferida é continuamente inibida em espécies de castanheiro suscetíveis porque o micélio produz toxinas e enzimas que degradam a parede celular. O ácido oxálico é um dos metabolitos que está associado a este processo tendo um efeito tóxico nas células hospedeiras e sendo excretado por C. parasitica no início do processo de infeção. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a produção de ácido oxálico em isolados virulentos e hipovirulentos isogénicos de C. parasitica em meio de cultura microbiológico. A avaliação da virulência dos isolados virulentos e hipovirulentos de C. parasitica foi realizada por inoculação em ramos de C. sativa. Este método permitiu caracterizar o grau de virulência de seis isolados virulentos; Cast13, VBC02, Cast26, Cast13, Cast17, Cast 07, VDP11 e dos isolados hipovirulento convertidos por RBB 111. A determinação do ácido oxálico por espectrofotometria permitiu avaliar a produção de ácido oxálico nos isolado virulentos e nos correspondentes isolados hipovirulentos convertidos